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目的：本课题组前期发现钙离子载体Ionomycin升高骨骼肌细胞胞浆钙离子浓度通过调节葡萄糖转运子4(GLUT4)运输促进葡萄糖吸收,ionomycin促进GLUT4胞吐并抑制GLUT4胞吞,为明确详细的信号机制,本课题探讨AMPK、CaMKII和PKC在ionomycin调节GLUT4胞吞和胞吐机制中的作用。方法：用终浓度为1μM的ionomycin孵育稳定过表达GLUT4myc的L6-GLUT4myc骨骼肌肌细胞,ELISA法检测细胞膜表面GLUT4myc水平,western blot方法检测不同蛋白的磷酸化水平、蛋白表达水平以及各种化学性蛋白酶抑制剂对蛋白磷酸化的影响。siRNA技术下调目的蛋白表达水平,研究5’-AMP激活蛋白激酶(AMPK)、依赖钙调蛋白的蛋白激酶Ⅱ(calmoduling-dependent protein kinase II, CaMKII)是否参与ionomycin调节的GLUT4myc胞吞和胞吐作用。采用传统型和新颖型PKC抑制剂G66983和传统型PKC抑制剂G66976抑制PKC活性,检测PKC是否参与ionomycin调节的GLUT4运输。结果：1μM钙离子载体ionomycin孵育L6-GLUT4myc骨骼肌肌细胞5分钟和10分钟,磷酸化CaMKII、AMPK和蛋白激酶C (PKCs),但不影响蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)。用siRNA下调CaMKIIδ的表达,抑制了ionomycin对GLUT4myc胞吐的调节作用,但不影响其对胞吞的作用,由此抑制了细胞表面GLUT4myc数量的增加。应用AMPK小分子抑制剂Compound C,不影响ionomycin抑制的GLUT4myc胞吞作用。应用CaMKK抑制剂STO-609,抑制了ionomycin刺激增加的GLUT4myc胞吐但不影响其对胞吞的抑制作用,由此降低了ionomycin增加细胞表面GLUT4myc的作用。传统型和新颖型PKC抑制剂G66983,抑制了ionomycin升高细胞表面GLUT4myc的作用,并抑制ionomycin对PKC底物的磷酸化作用。siRNA下调CaMKIIδ的表达,抑制了ionomycin对CaMKII T286的磷酸化作用,但不抑制ionomycin对AMPKT172的磷酸化作用。siRNA下调AMPK的表达,抑制了ionomycin对AMPKT172的磷酸化作用,但不降低ionomycin对CaMKII T286磷酸化的作用倍数。CaMKK抑制剂ST0609,抑制对照组对CaMKⅡ T286的磷酸化作用,但不抑制ionomycin对CaMKⅡ T286磷酸化的作用倍数。PKC抑制剂Go6976(传统型)和Go6983(传统型和新颖型)不影响ionomycin对AMPK和CaMKⅡ的磷酸化作用。结论：1. Ionomycin升高AMPK、CaMKⅡ和PKC底物磷酸化水平。2. CaMⅡδ参与ionomycin促进GLUT4myc胞吐的作用。3. AMPK和CaMⅡδ不参与ionomycin抑制GLUT4myc胞吞的作用。4.传统型或新颖型PKC参与ionomycin调节的GLUT4myc运输。5.下调CaMKⅡS的表达,不影响ionomycin对AMPK的磷酸化作用。6.下调AMPK的表达或ST0609,不影响ionmycin对CaMKⅡ的磷酸化作用。7.抑制PKC不影响ionomycin对CaMKⅡ和AMPK的磷酸化作用。这些结果证明了钙信号有选择地调节骨骼肌细胞GLUT4myc胞吐和胞吞。