IL-12对卵巢癌相关巨噬细胞B7-H1表达的影响及其机制的初步探讨

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目的1探讨卵巢癌细胞SKOV3对巨噬细胞B7-H1表达的影响及其可能机制。2进一步探讨IL-12对卵巢癌相关外周血单核细胞来源巨噬细胞B7-H1表达的影响及其机制。3探讨IL-12对卵巢癌相关THP-1来源巨噬细胞B7-H1表达的影响及其可能机制。方法1THP-1或人外周血单核细胞经PMA诱导分化为巨噬细胞后,与人卵巢癌细胞株SKOV3体外非接触共培养24h,qPCR、western blot及流式细胞术分别检测两种来源巨噬细胞B7-H1的表达;进一步利用NF-κB、JAK/STAT、p38MAPK信号通路的特异性抑制剂预处理两种来源巨噬细胞,之后再分别与SKOV3共培养24h,qPCR及western blot检测B7-H1的表达。2人外周血单核细胞来源巨噬细胞经外源性重组人IL-12(rIL-12)或携人全长IL-12基因的腺病毒(Ad-IL-12-GFP)处理24h,之后与SKOV3共培养24h。收集单核来源巨噬细胞用qPCR检测B7-H1的相对表达量;western blot检测B7-H1蛋白的表达及NF-κB信号通路的激活情况;同时收集上清用ELISA检测IL-12、IFN-γ、IL-10的水平。另一方面,单独用IFN-γ处理单核来源巨噬细胞,然后与SKOV3共培养,qPCR及western blot检测B7-H1的表达。另外先用NF-κB信号通路的抑制剂Bay11-7082预处理单核来源巨噬细胞,然后再用IL-12处理,之后共培养,检测B7-H1的表达。3同样地,THP-1来源巨噬细胞经rIL-12或Ad-IL-12-GFP处理24h后,与SKOV3共培养24h。收集THP-1来源巨噬细胞,qPCR及western blot检测B7-H1的表达;同时收集共培养后的上清,ELISA分析IL-12、IL-10、IFN-γ的表达。结果1THP-1来源巨噬细胞及单核来源巨噬细胞与SKOV3共培养24h后,B7-H1在mRNA及蛋白水平都较单独培养组显著升高(p<0.05),而阻断NF-κB、JAK/STAT、p38MAPK信号通路,B7-H1的上调被明显抑制(p<0.05)。2与对照组相比,rIL-12或Ad-IL-12-GFP处理组的人外周单核来源巨噬细胞的B7-H1明显升高(p<0.05),同时伴随有IFN-γ的显著升高(p<0.05)、IL-10的显著降低(p<0.05),以及NF-κB信号通路的激活。而在用Bay11-7082抑制NF-κB信号通路后,IL-12所致的B7-H1上调被抑制(p<0.05)。经IFN-γ处理后的外周单核来源巨噬细胞与SKOV3共培养后,也有B7-H1的明显升高(p<0.05)。3不同的是,THP-1来源巨噬细胞经过相同的处理,B7-H1的表达却下降(p<0.05),检测共培养后的上清有IL-10的显著下降(p<0.05),但各组几乎均检测不到IFN-γ的表达。结论1卵巢癌细胞SKOV3促进了巨噬细胞B7-H1的表达,其机制可能涉及NF-κB、JAK/STAT、p38MAPK信号通路的激活。2IL-12可上调外周单核来源巨噬细胞的B7-H1的表达,这可能主要与IL-12促进IFN-γ的分泌,并进一步激活NF-κB信号通路有关。3IL-12下调THP-1来源巨噬细胞的B7-H1的表达,可能与IFN-γ的缺乏以及IL-12显著抑制了IL-10的分泌有关。
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