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研究目的:探讨细胞核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factorκB,RANK)/细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)对人子宫内膜癌细胞转移和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响;进一步研究chemokine ligand 20(CCL20)在RANK/RANKL诱导子宫内膜癌细胞EMT中的作用机制。方法:体外构建针对RANK的过表达质粒载体(p IRES2-3FLAG-EGFP-RANK),并以空白质粒载体(p IRES2-3FLAG-EGFP-CON236)作为对照。脂质体法转染子宫内膜癌HEC-1A细胞及Ishikawa细胞,上调RANK表达水平。分别给、或不给予RANKL处理子宫内膜癌HEC-1A和Ishikawa细胞。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western blot技术分别检测子宫内膜癌细胞RANK的m RNA及蛋白水平。细胞划痕试验、Transwell试验、CCK-8试验分别检测RANK/RANKL对内膜癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响。q RT-PCR、Western blot技术、细胞免疫荧光技术分别检测EMT相关指标E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及Snail、Twist的m RNA及蛋白表达变化。分别采用蛋白芯片技术、酶联免疫吸附试验(ELISA)分析趋化因子CCL20在RANK/RANKL诱导的子宫内膜癌细胞EMT中的表达和分泌水平。建立人子宫内膜癌原位小鼠模型,并采用q RT-PCR及ELISA法体内分析CCL20的表达和分泌水平。免疫组化分析RANK、RANKL、E-cadherin、N-cadherin及Vimentin在各期子宫内膜癌组织切片中的表达情况,并采用Spearman相关分析分别分析RANK与E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达相关性。结果:1.随着子宫内膜癌分期的升高,其组织中RANK、RANKL的表达水平明显提高,且RANK的蛋白水平与N-cadherin(p=0.0229)、Vimentin(p=0.0398)的水平呈现正相关性,与E-cadherin(p=0.0118)的水平呈现负相关性。2.RANK/RANKL明显促进内膜癌HEC-1A及Ishikawa细胞的迁移、侵袭能力(P<0.01),但并不影响细胞的增殖。3.RANK/RANKL上调内膜癌HEC-1A及Ishikawa细胞中EMT相关指标N-cadherin、Vimentin及Snail、Twist的m RNA及蛋白表达(P<0.05),下调了E-cadherin的m RNA及蛋白水平(P<0.05)。4.HEC-1ARANK及IshikawaRANK细胞经RANKL处理后,其CCL20的表达和分泌水平显著提高(P<0.001)。5.子宫内膜癌原位移植小鼠模型中,RANK/RANKL可增加动物瘤组织及血清中CCL20的表达和分泌水平(P<0.01)。6.CCL20可促进RANK过表达的内膜癌细胞发生迁移,上调N-cadherin、Vimentin及Twist的蛋白水平(P<0.05),下调E-cadherin的蛋白水平(P<0.01)。结论:1.RANK/RANKL可诱导子宫内膜癌HEC-1A、Ishikawa细胞发生上皮间质转化,促进肿瘤的转移。2.RANK/RANKL通过上调子宫内膜癌细胞中CCL20的表达和分泌水平,从而促进癌细胞发生上皮间质转化、增强其迁移/侵袭能力,加快肿瘤的进展。