【摘 要】
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近年来,光学纳米探针被广泛用于肿瘤标记物检测等疾病诊断领域。与量子点等荧光探针相比,基于等离子体纳米颗粒的表面增强拉曼散射(Surface-enhanced Raman Scattering,SERS)探针具有峰形窄、灵敏度高、抗光漂白、操作简单等优势,有望成为下一代高灵敏度纳米探针。当前,基于单颗粒等离子体纳米颗粒合成的SERS探针,因其合成方法简单高效被广泛应用,但其表面电磁场较弱导致信号增强
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近年来,光学纳米探针被广泛用于肿瘤标记物检测等疾病诊断领域。与量子点等荧光探针相比,基于等离子体纳米颗粒的表面增强拉曼散射(Surface-enhanced Raman Scattering,SERS)探针具有峰形窄、灵敏度高、抗光漂白、操作简单等优势,有望成为下一代高灵敏度纳米探针。当前,基于单颗粒等离子体纳米颗粒合成的SERS探针,因其合成方法简单高效被广泛应用,但其表面电磁场较弱导致信号增强程度低。利用等离子体颗粒间隙形成的活性热点开发颗粒聚集型SERS探针是当前的研究热点。此外,在实际应用中,将SERS探针从复杂溶液中快速分离出来需要复杂的分离过程。借助磁性纳米材料的响应分离特性,开发磁性SERS探针成为一个重要的研究方向。如何将磁性材料与高亮度SERS探针结合起来是当前需要解决的关键问题。本文提出以Fe3O4@Si O2微球为内核,以单分散Au纳米颗粒为等离子体单元,选用巯基苯甲酸(MBA)作为报告分子,通过调控Au纳米颗粒之间静电相互作用,在Fe3O4@Si O2微球表面构筑大量的含有MBA报告分子的Au纳米颗粒二聚体,利用间隙热点的增强效应,从而合成出高亮度磁性SERS探针。在此基础上,探讨了该磁性SERS探针在试纸条免疫检测癌症标志物方面的应用。具体研究内容如下:(1)单分散Au纳米颗粒的可控合成及静电力调控聚集。本课题针对柠檬酸钠一步法制备Au纳米颗粒存在尺寸不均匀和形貌不规则等问题,提出采用种子介入生长,通过系统研究种子用量、溶液p H等与最终产物形貌的关系,优化反应参数,调控Au纳米颗粒生长从岛状模式向层层沉积模式转变。利用4.2 nm的Au纳米颗粒作为种子,在层层沉积生长模式下,实现了5-50 nm均匀球形Au纳米颗粒的可控合成。基于配体交换,在上述合成的Au纳米颗粒表面引入巯基苯甲酸(MBA)探针分子,考察溶液p H对MBA修饰Au纳米颗粒间静电斥力的调控和Au纳米颗粒的聚集行为,获得间隙型SERS探针,由于探针分子位于聚集体间隙,其拉曼信号比单颗粒SERS探针高约2个数量级。(2)高亮度磁性SERS探针的合成及对肿瘤标志物的高灵敏度检测。本课题针对当前磁性SERS探针合成中,探针分子无法有效进入活性热点导致拉曼信号差的问题,提出以预先修饰有探针分子的Au纳米颗粒作为组装单元,在上一章节的基础上,调控二聚体Au纳米颗粒探针在磁性微球表面的形成,从而实现单分散高亮度磁性SERS探针的开发。以氨基修饰的单分散Fe3O4@Si O2微球(Fe3O4@Si O2-NH2)为核,以MBA修饰的Au纳米颗粒(MBA-Au)为组装单元,首先基于磁性微球表面氨基与MBA-Au纳米颗粒表面羧基的静电吸引作用,在Fe3O4@Si O2-NH2微球表面形成MBA-Au纳米颗粒单层;其次通过调节溶液p H值,调控Fe3O4@Si O2-NH2表面MBA-Au纳米颗粒与溶液中MBA-Au之间的静电斥力作用,实现高密度二聚体Au探针在磁性微球表面的形成。以癌胚抗原(CEA)抗体为例,通过二氧化硅壳层包覆和抗体修饰,以试纸条为检测平台,探究本实验中磁性SERS探针对CEA抗原的检测效果。研究表明免疫磁性SERS探针可以通过富集CEA抗原,极大地提高其检测水平,检测限达到0.1 pg/m L,比常规试纸条显色检测极限低约5个数量级。
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