辣椒组培再生体系和花培体系的建立及其应用研究

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辣椒(Capsicum annuum L.)是一种十分重要的蔬菜和工业原料作物,富含维生素C及辣椒素等多种活性物质,对人体具有重要保健作用。辣椒高产优质生产取决于优良品种的应用与推广,而现代生物技术为辣椒的遗传改良提供了契机。本论文研究建立了辣椒离体培养再生体系和花培体系,并利用离体再生体系开展了辣椒农杆菌介导的遗传转化应用研究。主要结果如下:(1)选择储藏期一年以内的辣椒种子培养辣椒外植体,能够有效提高辣椒组织培养的效率;(2)12—16d的苗龄辣椒无菌苗的子叶是组织培养的最佳外植体;(3)建立以辣椒子叶为外植体的丛生芽直接诱导体系,在分化培养基中,添加BA和IAA有利于丛生芽的诱导,但浓度高于5 mg·L-1的BA不利于丛生芽的伸长。添加4 mg·L-1AgNO3有利于辣椒的分化。在本研究中最适合的诱导培养基为MS+BA5.0 mg·L-1+IAA 0.1 mg·L-1+AgNO3 4mg·L-1;(4)不同的基因型辣椒子叶和下胚轴的丛生芽的诱导率有显著的差异;(5)1 mg·L-1的GA3对辣椒丛生芽的伸长有促进作用,高于此浓度则容易产生畸形芽,且不容易扭转;(6)筛选出辣椒生根培养基的最佳配方为:1/2 MS+NAA 0.1 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1;(7)辣椒遗传转化试验表明,500 mg·L-1的羧苄青霉素能达到抑制农杆菌生长的目的,辣椒的潮霉素致死浓度可以达到80 mg·L-1;(8)辣椒子叶遗传转化的最佳条件:辣椒子叶必须预培养6 d左右,用OD600值约为0.6的菌液浓度浸泡,浸泡时间约为7 min,共培养3~4 d后进行洗菌,筛选培养;(9)辣椒的不同基因型花药培养条件有显著差异;(10)花药发育时期和生长状况是影响花药培养的成败2个重要因素,应选择富有活力、单核靠边期的花药进行辣椒花药培养:(11)低温预处理会造成花药大量褐化死亡,诱导效果不如高温处理和常温培养;(12)花药培养中激素浓度配比和正常外植体分化培养有很大区别,我们筛选出的最佳诱导配方为:MS+IAA 0.1mg·L-1+BA 2mg·L-;(13)本研究获得少数花药植株,从形态学上可以初步鉴别其为单倍体植株。
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