背景：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,2008年全球新发病例约138万,占所有女性新增癌症病例的23%,导致458503位患者死于乳腺癌,是威胁女性健康的头号敌人。在乳腺癌的治疗中,阿霉素是首选的一线药物,阿霉素作用于DNA化学结构,其作用机理主要是嵌入DNA而抑制核核酸的合成,对机体可产生广泛的生物化学效应,具有强烈的细胞毒性作用。阿霉素副作用有恶心、呕吐胃肠道反应,骨髓抑制造成外周血白细胞数量减少,脱发,等等众多常见化疗副作用,最严重的副作用是该药物具有心脏毒性,严重时可以起化疗患者心力衰竭,导致死亡。如何降低阿霉素的毒副作用,增强患者对药物副作用的耐受,是目前相关研究领域的热点之一。核酸识体(aptamers),又可称为化学抗体,与抗体类似,是具备识别功能的单、短链核糖核酸。筛选核酸识体的技术通常称为配体指数富集系统进化SELEX(systematic evolution of ligands by exponential enrichment),这项技术的大体流程是将一1013-1016的ssDNA或ssRNA随机文库与靶向物共同孵育,经PCR技术扩增特定与靶向物结合的序列,通过数轮的筛选得到与靶向物特异结合的核酸识体。这些核酸识体的靶向物可以是小的有机分子、金属离子、蛋白质、细胞甚至是组织。通过折叠形成特殊的二级及三级结构,核酸识体能像抗体那样高效地、专一地识别靶向物。与天然形成的抗体相比较,人工生成的核酸识体有以下几大优势。这包括快速及高效合成、容易修饰、较高的稳定性、低毒性、不会导致免疫反应、高组织通透性以及为实现不同的诊断治疗目的可进行特殊的修饰。本实验拟检测从乳腺癌细胞筛选中得到的核酸识体与靶细胞的结合能力,挑选出其中结合能力出众的核酸识体,研究核酸识体是否能特异被靶细胞内吞,证实其是否具备进一步研发成药物载体的可能,进而通过简单的化学修饰,使之成为阿霉素药物载体,判断其是否可应用于乳腺癌的靶向治疗。方法和结果：首先检测乳腺癌细胞筛选结束后,经测序得到的核酸识体与靶细胞、阴性对照细胞的结合能力。证实其中一条核酸识体,KMF2-1a,具备良好的特异识别靶细胞的能力,结合稳定,不受温度及时间的影响。在进一步的检测中发现该核酸识体能特异与雌激素受体、孕激素受体及HER-2表达阴性的乳腺癌细胞系(MCF-10AT1, MDA-MB-231)结合,KMF2-1a有望成为特异识别三阴性乳腺癌的核酸识体。其次,利用流式细胞仪检测技术及激光共聚焦扫描显微镜检测技术,检测核酸识体KMF2-1a是否能被靶细胞MCF-1OAT1特异内吞。首先通过胰蛋白酶处理细胞,证实其可以消除KMF2-1a与细胞结合后的荧光信号。利用此现象,将KMF2-1a与细胞在37℃下孵育,通过胰蛋白酶处理后经流式细胞仪检测,仍得到荧光信号,证实KMF2-1a被靶细胞内吞。并通过共聚焦成像进-步证实了此结论,且KMF2-1a定位于内吞体细胞器。最后,利用阿霉素嵌入至GC碱基互补对的原理,将KMF2-1a的一端添加GC碱基互补对,作为药物载体。经MTS实验检测该靶向药物对细胞活性的影响,证实该药物能降低阿霉素对正常细胞的杀伤,-定程度上减轻了阿霉素的副作用,达到了靶向化疗的目的。结论：核酸识体KMF2-1a具备良好的与乳腺癌细胞结合的能力,能够被靶细胞MCF-10AT1特异内吞。利用其作为阿霉素药物载体,可减轻阿霉素药物副作用。