【目的】
　　1.从紫球藻中提取出小分子多肽，鉴定该多肽的序列，分析多肽的结构并合成小分子多肽。
　　2.建立紫外辐射诱导的HSF细胞模型，评价紫球藻源多肽对该模型的保护作用。
　　3.探讨紫球藻源多肽对紫外损伤细胞模型的Ⅰ型和Ⅲ胶原蛋白、基质金属蛋白酶MMP-1、基质金属蛋白酶组织抑制因子TIMP-1水平表达的影响。
　　【方法】
　　扩大培养紫球藻7天后收集，冷冻干燥并称重。紫球藻藻粉加入双蒸水，联合反复冻融法和超声波破碎法破碎紫球藻细胞。紫球藻细胞破碎后离心取上清液。紫球藻蛋白粗提液经Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分离出小分子多肽。切下目标胶条，通过胶内酶解，液相色谱-质谱联用分析法鉴定目标条带蛋白。根据鉴定结果，从序列N端到C端合成多肽。紫外辐射诱导HSF细胞损伤，MTT法检测损伤的HSF细胞存活率。MTT法检测紫球藻多肽对保护损伤的HSF细胞的最适浓度。细胞免疫荧光法检测紫球藻多肽对损伤的HSF细胞中Col1A1、ColⅢ的表达的影响。酶联免疫吸附反应检测紫球藻多肽对紫外损伤HSF细胞分泌的TIMP-1表达的影响。蛋白免疫印迹实验检测紫球藻多肽对紫外损伤HSF细胞的Col1A1和MMP-1表达的影响。
　　【结果】
　　1.紫球藻经离心冷冻干燥后，得到紫球藻藻粉2.2g。紫球藻藻粉用双蒸水定容至30mL，经冷冻干燥联合超声波破碎，离心得到的15mL蛋白粗提液。蛋白粗提液经BCA法测得蛋白浓度为3.75mg/mL，紫球藻蛋白提取率为2.5%。
　　2.紫球藻蛋白粗提液经Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分离出分子量低于10kDa的条带。
　　3.目标条带经鉴定含六条不同的蛋白多肽，其中有两条未知功能的多肽。这两条多肽的序列分别为IFNLSK,FTRPREVAAALPPPSPR。
　　4.合成的IFNLSK六肽分子量为720.87Da，纯度为98.79%。合成的FTRPREVAAALPPPSPR十七肽分子量为1862.18Da，纯度为98.09%。
　　5.紫外损伤HSF细胞相对存活率为50%时的照射时长为2.5min。紫球藻17肽3.125μg/mL、6.25μg/mL两个浓度作用于紫外损伤的的HSF细胞OD值均明显高于模型组，其他浓度组趋势不明显。所以选取紫球藻17肽3.125μg/mL~6.25μg/mL作为最适浓度范围。
　　6.细胞免疫荧光检测：与control组比较，模型组HSF细胞的数量减少，Col1A1、ColⅢ的表达量下降。与模型组比较，含紫球藻17肽的紫外损伤HSF细胞的Col1A1、ColⅢ的表达相对增加。即紫球藻17肽可增强紫外损伤的HSF细胞中Col1A1、ColⅢ的荧光表达。
　　7.酶联免疫吸附实验：紫球藻17肽6μg/mL组，3μg/mL组分别含TIMP-11.33ng/mL，1.13ng/mL，均高于模型组0.87ng/mL。即紫球藻17肽可促进HSF细胞TIMP-1的分泌。
　　8.蛋白免疫印迹实验：与模型组比较，紫球藻17肽3μg/mL组、6μg/mL组Col1A1的表达量增加。即紫球藻17肽能促进紫外损伤HSF细胞Col1A1的表达。与模型组比较，紫球藻17肽3μg/mL组、6μg/mL组MMP-1的表达量降低。即紫球藻17肽能抑制紫外损伤HSF细胞MMP-1的表达。
　　【结论】
　　1.在紫球藻中提取并鉴定出两条未知功能的全新多肽，序列分别为IFNLSK,FTRPREVAAALPPPSPR。
　　2.紫球藻17肽能促进紫外损伤的HSF细胞TIMP-1和Col1A1、ColⅢ的表达，抑制MMP-1的表达，具有抗光老化活性。