【摘 要】
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[背景]随着胚层限制理论的打破,成体干细胞的可塑性已成为近年来的研究热点。脐血干细胞以其干细胞含量高、来源丰富、采集简单、比较纯净等特点可能成为包括肝细胞在内的多种
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[背景]随着胚层限制理论的打破,成体干细胞的可塑性已成为近年来的研究热点。脐血干细胞以其干细胞含量高、来源丰富、采集简单、比较纯净等特点可能成为包括肝细胞在内的多种细胞的较好来源。[目的]探讨在细胞外基质人血浆纤维连接蛋白的存在下,用成纤维细胞因子4(FGF—4)和肝细胞生长因子(HGF)联合诱导人脐血单个核细胞向肝样细胞分化的可行性。[方法]采集足月健康产妇脐带血至含CPDA抗凝剂的无菌采血袋中,用等体积3%明胶沉淀红细胞后采用密度梯度离心法分离单个核细胞,利用贴壁时间的差异去除成熟贴壁细胞,然后接种于DMEM低糖培养基,在用人血浆纤维连接蛋白包被过的培养板中进行贴壁培养。分为诱导组和未诱导组两组,诱导组添加细胞因子HGF和FGF-4。在培养的第0、7、14、21、28天,分别以RT-PCR和免疫细胞化学染色方法检测分析甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)、角蛋白18(CK-18)在转录和翻译水平的表达情况。并用糖原染色(PAS)方法检测诱导后细胞是否具有正常成熟肝细胞合成糖原的功能。[结果](1)倒置显微镜下观察到的形态变化:诱导后细胞体积逐渐变大,形状由圆形逐渐变为椭圆形、不规则圆形、多边形等,部分具有双核多核呈现出典型的肝样细胞的形态特点。在细胞密度较高的区域有多个细胞聚集在一起的融合现象,这些高密度区域的细胞形态变化较低密度区更为明显。(2)免疫细胞化学染色结果:诱导后第7、14、21、28天ALB和CK-18染色均为阳性着色;AFP染色在诱导第7、14天呈阳性着色,第21天阳性着色细胞减少,到28天基本变为阴性。在未诱导组这些指标均未见表达。(3)PAS染色结果:在第21天呈现弱阳性着色,到第28天显示强阳性着色。无细胞因子组染色呈阴性。(4)RT-PCR结果:在诱导后7、14、21天未成熟肝细胞具有的表型AFP在转录水平有表达,到28天后即呈阴性表达。成熟肝细胞表型ALB和CK-18于诱导的第7天在转录水平就开始表达,于诱导的第14天就有明显表达并一直持续到检测的第28天。[结论]联合应用HGF和FGF-4可诱导脐血单个核细胞向肝细胞表型和功能的细胞分化。这种培养体系可能为用细胞移植疗法治疗损伤性疾病提供肝细胞。
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摘 要:随着新课改的不断推进,人们对地理教学的要求越来越高。以教师传授知识为主的传统教学方式已经无法满足学生的学习需求,教师要不断加强教学方法研究,更新教学理念,采取有效的教学策略激发学生学习地理的兴趣,将琐碎抽象的地理概念生动形象地传递给学生,促进学生理解消化吸收,从而促进地理教学高效课堂实现。以下,笔者从多年教学实践的角度出发,跟各位同仁分享在构建高中地理高效课堂研究中的几点体会。 关键词:
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