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以本实验室保藏的中性纤维素酶产生菌木霉ZC(Trichodez7Fla sp.)为出发菌株,经紫外线、NTG、N+注入多次诱变,得到一株高产突变菌株BE40—39,发酵液FPase酶活由33U/mL提高到92LI/mL。突变菌株与出发菌株在平板上的生长速度没有明显的变化,突变菌株菌落颜色比出发菌株菌落颜色稍浅,为浅绿色。出发菌株和突变菌株基本上都没有解除分解代谢物阻遏,但突变菌株发酵时产酶时间明显延长,这可能是突变菌株发酵液酶活提高的主要原因。 本文确定的以球磨AVicel为底物的筛选平板,是一种有效的高产菌初筛方法,菌落透明圈的直径与菌落的直径之比(D/d)与菌株液体发酵液酶活基本上呈线性关系。 纤维素酶是一种诱导酶,在对几种纤维素质碳源对纤维素酶的诱导作用比较之后,发现AVicel和纸浆对纤维素酶的诱导作用最好。还研究了不同的氮源对产酶的影响。经正交试验确定最佳培养基为:Avicel O.8g/100mL,纸浆O.6g/lOOmL,胰蛋白胨O.45g/lOOmL,KH2PO40.4g/lOOmL,(NH4)2S040.3g/lOOmL,豆饼粉0.3g/100mL,MgSO4 0.03g/lOOml,CaCl2 0.03g/lOOmL,麸皮2.5g/100mL,最终发酵液FPase酶活力为106U/ml。最适培养条件为:培养基的起始pH为4.2,培养温度为32℃,摇床转速为120r/min,接种量为7.5%,种子种龄为48小时。添加Tweern一80能明显提高发酵液的酶活。在发酵48h,添加量为0.6g/100mL,发酵液FPase酶活力能提高48%。 对发酵液粗酶的性质作了初步的研究。采用3倍体积的工业酒精沉淀纤维素酶,回收率最高为9l%。对纤维素酶的最适pH值,稳定pH值范围,热稳定性和缓冲液种类对酶活的影响作了研究。Mn2+、Fe2+、Co3+,对该酶有明显的激活作用。Cu2+对该酶有明显的抑制作用,Fe3+在低浓度(小于0.33 mmoL/L)对该酶有激活作用,但Fe3+大于1.67 mm01/L对酶活有明显的抑制作用。表面活性剂样品X和PVp-K30能明显提高酶的活性。醇类一般都可提高中性纤维素酶的热稳定性,其中甘油效果最好。一般糖类都能提高中性纤维素酶的热稳定性,其中纤维二糖提高热稳定的作用特别显著。Co2+、Zn2+、Ca2+对中性纤维素酶的热稳定性都有不同程度的提高。并发现这些因素对纤维素酶的FPase和CMCase酶活性影响不同。