研究背景顺铂是一种常见的用于治疗癌症的化疗药物,尤其是对睾丸癌患者的治愈率非常高。目前睾丸癌治疗中面临的最大的问题是患者经过药物顺铂化疗之后,出现的毒副作用严重影响了病人的生活质量。所以开发新的顺铂增敏剂,提高顺铂的治疗效率,减少顺铂治疗带来的副作用是解决这一问题的关键点。microRNA (miRNA,即微小RNA)是一类长约21～25个核苷酸的非编码小分子RNA。一般情况下,成熟的miRNA可以通过与其靶基因的特定mRNA完全或不完全配对,降解其mRNA或抑制其转录后翻译来调控基因的表达。近年来,许多文献报道miRNA在化疗药物治疗癌症的过程中起到非常重要的作用,甚至调节癌症细胞对化疗药物的敏感性。这对研究肿瘤的发生、发展以及诊断、治疗和预后都有非常重要的作用。目前的研究发现,在恶性生殖细胞瘤中miR-302a过表达,而在良性生殖细胞瘤中却未发现,说明miR-302a可以成为一种恶性生殖细胞瘤的血清学分子标志物。但是,miR-302a是否参与到顺铂治疗睾丸癌的过程中及miR-302a是否与顺铂诱导的睾丸癌细胞凋亡敏感性有关却未见报道。研究目的研究miR-302a对人睾丸癌细胞系NTERA-2细胞的增殖、周期以及在顺铂刺激下对敏感性及凋亡的影响,并初步探讨其内在分子机制。研究方法通过实时定量扩增技术检测分析miR-302a在顺铂刺激睾丸癌细胞NTERA-2中的表达。通过转染试剂将外源合成的miR-302a模拟物在NTERA-2中过表达,进一步通过细胞增殖实验、细胞敏感性试验、流式细胞术(细胞周期和细胞凋亡)以及Vestern blotting等方法检测过表达miR-302a在NTERA-2细胞的增殖、周期、凋亡发生等生物学功能方面发生的改变及其可能的分子机制。研究结果顺铂刺激睾丸癌细胞系NTERA-2时可以诱导miR-302a的表达。外源过表达miRNA-302a模拟物,可以提高顺铂诱导的G2/M期的停滞,并进而通过提高NTERA-2细胞对顺铂的敏感性,增强顺铂诱导的NTERA-2细胞的凋亡。同时,miR-302a可以通过降低顺铂的凋亡阈值使睾丸癌细胞系NTERA-2细胞发生凋亡。这种现象在另外一种睾丸癌细胞系NCCIT中同样存在。进一步分析其分子机制,我们发现,miR-302a提高顺铂对睾丸癌细胞的敏感性部分依赖于下调其靶基因p21的表达水平,下调p53同样可以增强miR-302a对顺铂的凋亡效应。这种现象可能是由于沉默了p53导致miR-302a的转录因子包括Oct4、Sox2以及Nanog的表达水平提高而造成的。研究结论综上所述,miR-302a可以通过提高顺铂的敏感性,促进其诱导的睾丸癌细胞的凋亡。这使得miR-302a有可能成为一个新的治疗睾丸癌的靶标,并以此来降低化疗药物顺铂的剂量,从而更好地降低顺铂在治疗过程中带给患者的副作用。