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目的：
通过体外培养牙龈成纤维细胞(Human gingival fibroblast, HGF)，用牙龈卟啉单胞菌(PorPhyromonas Gingivalis，Pg)脂多糖(LPoPolysaccharide，LPS)刺激牙龈成纤维细胞建立牙周炎细胞模型，采用不同能量密度低水平激光(Low Lever Light Therapy, LLLT)照射牙周炎细胞模型，通过检测细胞增殖情况及骨膜蛋白和I型胶原表达量的变化，研究LLLT对细胞外基质蛋白表达的影响、寻找低水平激光发挥作用的最佳参数及其发挥作用的机制。
方法：
1.组织块法提取原代牙龈成纤维细胞，免疫组织化学法鉴定细胞来源。
2.Real-timePCR法检测Pg.LPS刺激HGF后24h内IL-6的mRNA表达的情况，以及2h、4h、6h、12h、24h时间点骨膜蛋白和I型胶原的表达情况。
3.能量密度为2J/cm2、4J/cm2、8J/cm2的650nm低能量激光照射牙周炎细胞模型，MTT法检测细胞增殖情况。
4.Real-timePCR和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA)分别用于检测LLLT作用下细胞内骨膜蛋白和Ⅰ型胶原基因和蛋白水平的变化，确定激光作用的最佳参数，在最佳参数设定下，加入通路抑制剂SIS3，ELISA法检测两种蛋白表达变化。
结果：
1.组织块法可成功提取牙龈成纤维细胞，显微镜下细胞形态为星形或长梭形。免疫组化法检测细胞组分显示：细胞抗波形丝蛋白染色阳性，抗角蛋白染色阴性。
2.Real-timePCR检测结果示：Pg.LPS刺激后IL-6表达显著增加，HGF处于炎症状态。在2h、4h、6h、12h骨膜蛋白表达量低于对照组(p＜0.05)，其中12h表达量最低(p＜0.05)。在6h、12hⅠ型胶原的表达均较低(p＜0.001)；12h后两种蛋白的表达随时间增加。
3.MTT实验结果表明：与牙周炎组相比，能量密度为2J/cm2、4J/cm2、8J/cm2时牙龈成纤维细胞的增殖率均明显增加(p＜0.05)，能量密度为4J/cm2时增殖率最高(p＜0.001)
4.Real-timePCR结果表明：LLLT照射后骨膜蛋白和I型胶原的表达明显高于牙周炎组(p＜0.05)，能量密度为4J/cm2时，HGF表达骨膜蛋白和Ⅰ型胶原最高(p＜0.01)；ELISA结果显示：与牙周炎组相比，LLLT照射后,Ⅰ型胶原含量增加(p＜0.05)。当能量密度设定为4J/cm2时，骨膜蛋白和Ⅰ型胶原表达量最高(p＜0.01)。加入通路抑制剂SIS3后，骨膜蛋白和Ⅰ型胶原表达均下降(p＜0.05)。
结论：
1.组织块法可成功培养原代牙龈成纤维细胞，细胞增殖较快，对干预反应好，能满足实验需求。
2.2ug/mlPg.LPS能促进牙龈成纤维细胞大量分泌炎症因子，成功建立牙周炎细胞模型。牙周炎细胞模型中，骨膜蛋白和Ⅰ型胶原的表达整体上呈先下降后上升的趋势。说明炎症刺激后早期炎症破坏占优势，随时间延长组织修复愈合占优势。
3.与单纯牙周炎细胞组相比，在一定的激光参数范围内(2-8J/cm2)，LLLT能促进牙周炎细胞模型增殖，在激光参数设定为650nm、4J/cm2时，能最大程度促进细胞增殖。
4.在基因水平，能量密度范围在2-8J/cm2，650nm的低能量激光刺激骨膜蛋白和Ⅰ型胶原分泌。在激光参数设定为650nm、4J/cm2时，无论在基因水平和蛋白水平均能最大程度促进骨膜蛋白和Ⅰ型胶原分泌，且低水平激光可以通过TGF-β/smad3信号通路促进两种蛋白分泌。
通过体外培养牙龈成纤维细胞(Human gingival fibroblast, HGF)，用牙龈卟啉单胞菌(PorPhyromonas Gingivalis，Pg)脂多糖(LPoPolysaccharide，LPS)刺激牙龈成纤维细胞建立牙周炎细胞模型，采用不同能量密度低水平激光(Low Lever Light Therapy, LLLT)照射牙周炎细胞模型，通过检测细胞增殖情况及骨膜蛋白和I型胶原表达量的变化，研究LLLT对细胞外基质蛋白表达的影响、寻找低水平激光发挥作用的最佳参数及其发挥作用的机制。
方法：
1.组织块法提取原代牙龈成纤维细胞，免疫组织化学法鉴定细胞来源。
2.Real-timePCR法检测Pg.LPS刺激HGF后24h内IL-6的mRNA表达的情况，以及2h、4h、6h、12h、24h时间点骨膜蛋白和I型胶原的表达情况。
3.能量密度为2J/cm2、4J/cm2、8J/cm2的650nm低能量激光照射牙周炎细胞模型，MTT法检测细胞增殖情况。
4.Real-timePCR和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA)分别用于检测LLLT作用下细胞内骨膜蛋白和Ⅰ型胶原基因和蛋白水平的变化，确定激光作用的最佳参数，在最佳参数设定下，加入通路抑制剂SIS3，ELISA法检测两种蛋白表达变化。
结果：
1.组织块法可成功提取牙龈成纤维细胞，显微镜下细胞形态为星形或长梭形。免疫组化法检测细胞组分显示：细胞抗波形丝蛋白染色阳性，抗角蛋白染色阴性。
2.Real-timePCR检测结果示：Pg.LPS刺激后IL-6表达显著增加，HGF处于炎症状态。在2h、4h、6h、12h骨膜蛋白表达量低于对照组(p＜0.05)，其中12h表达量最低(p＜0.05)。在6h、12hⅠ型胶原的表达均较低(p＜0.001)；12h后两种蛋白的表达随时间增加。
3.MTT实验结果表明：与牙周炎组相比，能量密度为2J/cm2、4J/cm2、8J/cm2时牙龈成纤维细胞的增殖率均明显增加(p＜0.05)，能量密度为4J/cm2时增殖率最高(p＜0.001)
4.Real-timePCR结果表明：LLLT照射后骨膜蛋白和I型胶原的表达明显高于牙周炎组(p＜0.05)，能量密度为4J/cm2时，HGF表达骨膜蛋白和Ⅰ型胶原最高(p＜0.01)；ELISA结果显示：与牙周炎组相比，LLLT照射后,Ⅰ型胶原含量增加(p＜0.05)。当能量密度设定为4J/cm2时，骨膜蛋白和Ⅰ型胶原表达量最高(p＜0.01)。加入通路抑制剂SIS3后，骨膜蛋白和Ⅰ型胶原表达均下降(p＜0.05)。
结论：
1.组织块法可成功培养原代牙龈成纤维细胞，细胞增殖较快，对干预反应好，能满足实验需求。
2.2ug/mlPg.LPS能促进牙龈成纤维细胞大量分泌炎症因子，成功建立牙周炎细胞模型。牙周炎细胞模型中，骨膜蛋白和Ⅰ型胶原的表达整体上呈先下降后上升的趋势。说明炎症刺激后早期炎症破坏占优势，随时间延长组织修复愈合占优势。
3.与单纯牙周炎细胞组相比，在一定的激光参数范围内(2-8J/cm2)，LLLT能促进牙周炎细胞模型增殖，在激光参数设定为650nm、4J/cm2时，能最大程度促进细胞增殖。
4.在基因水平，能量密度范围在2-8J/cm2，650nm的低能量激光刺激骨膜蛋白和Ⅰ型胶原分泌。在激光参数设定为650nm、4J/cm2时，无论在基因水平和蛋白水平均能最大程度促进骨膜蛋白和Ⅰ型胶原分泌，且低水平激光可以通过TGF-β/smad3信号通路促进两种蛋白分泌。