论文部分内容阅读
蜘蛛丝属于纤维蛋白,是一种可降解且无污染的生物材料,它的高强度、高韧性和高弹性的优良性质受到各国研究人员的广泛关注,在纺织行业、医疗卫生和军事领域等方面有潜在的应用前景。本研究论文在本室前期工作的基础上,探讨已构建的基因重组蛛丝蛋白工程菌pNS2/BL21(DE3)如何提高重组蛋白得率的方法、湿态纺丝法中各因素对获得性能优良的重组拖丝蛋白纤维的影响,测试了该蛋白与其他高分子材料的共混支架的性能,对蛋白的降解行为和细胞相容性进行了分析和讨论,并首次尝试了电纺法制备重组蛛丝纤维。 人工蛛丝纤维的纺制和组织工程支架材料的开发的基础在于大量的重组蛛丝蛋白,首先对本室已建立的重组蛋白的发酵和纯化方案进行了改进、完善,以提高蛋白得率。确定了定期重新转化重组质粒的必要性以避免质粒在保存过程中的丢失,采用梯度流加法分批补料,在OD600为35~45诱导,添加前体物0.1%(w/v),最终可得目的蛋白表达水平最佳为0.5g/L(培养基)。经过破碎细菌的超声正交实验、调节pH、加热条件的优化,纯化重组蛋白的得率提高到大约3.5mg/g(湿菌体)。 湿态纺丝法可得到直径约50~70μm、白色较均匀、有一定力学性能的重组蛛丝共混纤维,蛋白含量为70%左右,经乙醇凝固成形、拉伸和水中增塑,最后冷冻干燥和加热干燥产生。尝试通过电纺法来获取人工蛛丝纤维,SEM下观察直径约300nm。首次制备了重组蛛丝蛋白与壳聚糖、丙烯酸树脂的共混支架并分析了力学性能和结构表征,适当的比例混合如含70%重组蛋白时可改善蛋白材料的脆性,提高了支架的综合性能。 进行了基因重组蛋白制备为支架材料后的体外降解实验,得到支架具有可降解性的结论。当添加剂加入后进行体外降解实验,观察到共混减缓了材料的降解速度。以CaCo2细胞进行细胞相容性实验,在去除小分子和内毒素后的支架材料上能够黏附、生长,可望进一步改进材料制作方法,达到相容性良好。