【摘 要】
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Rab族蛋白是小G蛋白Ras家族最大的亚家族,研究表明它主要参与细胞内的泡囊运输,调节生物体内各种蛋白在细胞内外的正确运输和分配,在真菌的生长发育过程中起到关键的作用。本
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Rab族蛋白是小G蛋白Ras家族最大的亚家族,研究表明它主要参与细胞内的泡囊运输,调节生物体内各种蛋白在细胞内外的正确运输和分配,在真菌的生长发育过程中起到关键的作用。本研究试图了解稻瘟病菌中Rab族蛋白的功能。首先,利用稻瘟病菌的数据库和相关生物信息学软件分析,结果表明在稻瘟病菌基因组中预测有10个Rab蛋白亚家族成员,这些Rab亚家族成员都具有其保守的结构域并且与其它物种间的Rab族蛋白存在着高度的同源性。然后,根据Rab家族成员的核酸序列设计引物,利用同源重组的原理构建基因敲除突变体,并对其进行Southern杂交和RT-PCR验证,结果得到一个具有代表性的Rab亚家族成员Rab8(Mgg06135.5)的敲除突变体。对该突变体进行表型分析,发现该突变体的菌丝较野生菌株有少许变粗,菌丝生长速度明显减慢;产孢量显著降低,分生孢子形态正常但有少许膨大,仍可以正常萌发并成功侵入洋葱表皮细胞;用其孢子液接种水稻叶片,病斑数显著减少,病情指数降低,致病能力减弱。进一步对该突变体进行互补实验,结果表明,互补菌株基本上可以恢复突变体所造成的表型缺陷。综上,MgRab8蛋白可能参与了稻瘟病菌极性生长相关蛋白的转运,该蛋白的缺失阻碍细胞的极性生长,表现为菌丝生长速度、产孢能力的降低,进一步导致其致病性减弱。
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