【摘 要】
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研究背景急性胰腺炎(Acute Pancreatitis,AP)按照疾病轻重程度可分为轻症急性胰腺炎(Mild acute pancreatitis,MAP)、中度重症急性胰腺炎(moderately severe acute pancreatitis,MSAP)和重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)。其中MAP一般具有自限性,预后良好,且占急性胰腺炎的绝大
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研究背景急性胰腺炎(Acute Pancreatitis,AP)按照疾病轻重程度可分为轻症急性胰腺炎(Mild acute pancreatitis,MAP)、中度重症急性胰腺炎(moderately severe acute pancreatitis,MSAP)和重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)。其中MAP一般具有自限性,预后良好,且占急性胰腺炎的绝大多数;MSAP和SAP分别伴有一过性或持续性器官功能衰竭(Multiorgan Failure),继发感染,死亡率较MAP明显升高,其中SAP患者的死亡率甚至可高达30%。近年来随着对急性胰腺炎发病机制的研究不断深入,全身炎症反应和代偿性抗炎反应已成为当前研究的热点,免疫治疗成为急性胰腺炎治疗的新方向。T细胞的完全活化需要两种信号的协同作用,第一信号是指抗原通过pMHC与T细胞直接结合,将抗原信号传导至信号内,第一信号使T细胞初步活化。共刺激分子在T细胞活化过程中传递第二信号,起到刺激或抑制T细胞活化的功能。PD-1是当前最热门的共刺激分子,PD-1抑制剂和PD-L1抑制剂已应用于肿瘤和脓毒症免疫治疗并取得了显著成效。B7-H4是一种共刺激分子,有研究发现可能与肿瘤的免疫逃逸有关,也可能与自身免疫性疾病的发展有关。在本课题中,我们将重点探讨B7-H4在AP病程中的变化及其意义,以期望为急性胰腺炎的早期分类诊断提供准确的依据和为急性胰腺炎免疫治疗提供新的思路。实验目的1.通过检测AP患者外周血清中IL-6,TNF-α,TPO,sB7-H4的表达情况,结合住院过程中的临床检验数据,分析IL-6,TNF-α,TPO,sB7-H4的表达与AP轻重程度的相关性。根据住院过程中的表达变化,有助于对SAP的早期诊断。2.通过收集AP患者外周血和健康对照组外周血样本,应用流式细胞术检测AP患者和健康人单核细胞中CD14+单核细胞上mB7H4的表达。3.通过将健康人外周血分离出的PBMC与AP患者血清共培养,检测血清中某些成分对PBMC中CD14+单核细胞上mB7H4表达的影响。实验方法1.应用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测AP患者外周血清中sB7-H4,IL-6,TNF-α,TPO的表达水平,采用统计学方法分析不同分组下,年龄,性别,sB7-H4,IL-6,TNF-α,TPO的差异;同时分析住院后第一天和第三天血清指标的差异,最后通过ROC曲线分析sB7-H4,IL-6,TNF-α,TPO和血清淀粉酶含量对早期预测SAP的作用。2.应用荧光标记抗体和流式细胞术,检测AP患者和健康对照样本外周血单核细胞中CD14+单核细胞上mB7H4的表达,并通过统计学分析比较两者的差异。。3.利用细胞共培养技术和流式细胞术,探索AP患者血清和健康人血清对健康人PBMC中CD14+单核细胞上mB7H4的表达。实验结果1.ELISA检测结果显示:入院第一天的SAP患者血清中sB7-H4,IL-6,TPO含量较MAP和MSAP组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。入院第三天,三组不同严重程度AP患者外周血血清中sB7-H4,TNF-α,TPO含量较第一天均有升高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。2.相关性分析结果显示:IL-6与改良Marshall评分、AP的严重程度、住院时间有关(P<0.05);TNF-α与AP患者的APACHEⅡ评分、AP的严重程度有关(P<0.05);TPO仅与AP的严重程度有关(P<0.05),与血小板计数和血小板分布宽度相关性没有统计学意义(P>0.05);sB7-H4与AP的疾病程度相关性最大,并且与APACHEⅡ评分有相关性(P<0.05)。3.ROC曲线分析结果显示:APACHE Ⅱ评分,血清中sB7-H4,IL-6,TPO的含量变化能早期诊断SAP。4.流式细胞分析结果显示:AP组患者CD14+单核细胞上mB7-H4的表达较健康对照组明显下降。5.细胞共培养实验结果显示:实验组PBMC中CD14+单核细胞上mB7-H4的表达较对照组下降更明显。结论1.入院时AP越严重,共刺激分子sB7-H4含量越高,且SAP患者的sB7-H4、炎症因子IL-6,TNF-α,TPO含量最高。2.sB7-H4,IL-6,TPO与AP严重程度都有相关性,其中sB7-H4与AP严重程度相关性最大。3.APACHEⅡ评分,sB7-H4,IL-6,TPO作为检测指标比TNF-α能更准确地早期诊断SAP患者,具有一定的临床应用价值。4.AP患者外周血中的CD14+单核细胞上mB7-H4的表达在TNF-α,IFN-γ等炎症因子的作用下表达下降,形成sB7-H4。
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