葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症(glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency)是最常见的人类酶缺陷病之一,世界范围内约有4亿人受累。该病及时的产前诊断、新生儿筛查和正确的治疗可以有效地预防新生儿黄疽。G6PD缺乏症的分子基础是基因突变,G6PD基因位于Xq28,由13个外显子及12个内含子组成,全长20114bp,是一典型的看家基因。随着G6PD基因结构的阐明和分子检测技术的发展,不断发现新的突变类型,迄今世界上已报道140多种。G6PD酶活性检测是临床最基本也是最常用的筛查和诊断方法,如高铁血红蛋白还原试验、荧光斑点法、硝基四唑氮蓝法、G6PD/6PGD比值法和直接法等,这些方法存在各自的优点和缺点。常规的基因诊断方法,如等位基因特异性扩增(ARMS)、错配碱基聚合酶链反应/限制性内切酶图谱分析(miswatch-PCR/RE )、等位基因寡核苷酸探针杂交(ASO)等方法检测已知突变,聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP )、变性梯度凝胶电泳(DGGE),温度梯度凝胶电泳(TGGE )等方法检测未知突变。变性高效液相色谱(DHPLC)应用于分离核苷酸片段及分析检测已知未知基因突变核SNP,可以高通量、敏感而准确地检测己知DNA变异,自动化程度高,降低成本,但DHPLC仪器昂贵,使用成本高。HRM(High Resolution Melt),中文译为“高分辨率熔解”是近几年来在国际上刚兴起的SNP及突变研究工具。这种检测方法不受突变碱基位点与类型的局限,无需序列特异性探针,在PCR结束后直接运行高分辨率熔解,即可完成对样品基因型的分析。这种方法因其操作简便、快速,使用成本低,结果准确,并且实现了真正的闭管操作而受到普遍的关注。本研究建立了一种应用HRM技术的G6PD基因诊断新方法,可以同时针对包括中国南方在内的东南亚人群常见的3种点突变(A95G, G1376T, G1388A)进行基因分型。结果表明:该方法易于质量控制,结果易于判读,可鉴定常见突变,并判定基因型。由于3种突变类型已覆盖了近90%的G6PD突变基因,因此在实际诊断中首先鉴定这3种突变即可满足绝大多数病人分子诊断的需求。HRM完全可以用于G6PD缺陷的基因诊断和大规模分子筛查,从而对疾病的预防和早期治疗发挥重要的作用。