目的：本研究在中医脏象理论基础指导下，基于RT-PCR及Western blot技术对前期蛋白质组学鉴定出的脾阴虚大鼠回肠差异表达蛋白进一步分析验证，试图通过寻找并探讨脾阴虚证差异蛋白谱来破解其物质基础及调控机制，梳理蛋白的生理功能及其相互关联，从系统生物学角度探讨脾阴虚证脾失健运的机理，寻找该证候特异性量化指标，并尝试性的构建脾阴虚证生理机制网络，为后期脾胃系疾病的临床诊疗提供准确、可靠的实验依据。材料与方法：SPF级健康Sprague-Dawley(SD)大鼠36只，鼠龄3个月。随机分成健康对照组（Contrast group，CG）、脾阴虚证模型组（Spleen yin deficiency model group，SG）及中药反证组(Traditional Chinese medicine disproof group，TG)，联合应用饮食不节、劳倦过度加耗伤阴液药的复合因素造模法，建立脾阴虚证脾失健运大鼠模型。造模共计16天，以8天为一个阶段，第一阶段即脾气虚证模型大鼠建立阶段，采用饮食不节、劳倦过度的方法；第二阶段即脾阴虚证模型大鼠经历阶段，在上述干预手段基础上给予耗伤阴液药。运用模糊数学方法在时间节点处对模型进行评价，造模成功后，给予理脾阴正方干预治疗，各组大鼠在造模期间均给予标准固体饲料饲养，模型组给药治疗的同时，其余各组予等量生理盐水灌胃，符合标准者取材备检。病理学观察各组大鼠回肠组织；通过RT-PCR判断目的基因mRNA转录水平相对含量的变化情况，从基因水平检测脾阴虚证相关蛋白mRNA表达的差异性；通过Western blot方法判断目标蛋白的相对量的变化，从蛋白水平检测脾阴虚证相关蛋白表达的差异性。结果：1脾阴虚大鼠回肠病理形态学观察结果健康对照组大鼠回肠肠壁基本结构完整清晰，粘膜内腺体排列规律整齐，未现浸润、坏死、脱落等病理改变；脾阴虚证模型组大鼠回肠肠粘膜处出现多处水肿，基本结构不完整，肠绒毛变矮、脱落；中药反证组大鼠回肠粘膜结构基本恢复正常，未见明显破坏。2RT-PCR法检测差异表达蛋白mRNA表达结果半定量分析比较各组大鼠回肠组织差异表达蛋白mRNA表达水平发现，与健康对照组比较，脾阴虚模型组回肠组织中CAT、Canx、ACO2及Papss2蛋白的mRNA表达均显著上升（P<0.05），而HSP90蛋白的mRNA表达显著下调（P<0.01）。经理脾阴正方干预后，大鼠回肠组织中CAT、Canx、ACO2及Papss2蛋白的mRNA表达与模型组相比较均显著下调（P<0.05），而HSP90蛋白的mRNA表达显著上升（P<0.05），但所有蛋白与正常组比较都没有明显差异（P>0.05）。内参β-actin其PCR产物在各组表达无显著性差异（P>0.05）。3Western blotting法检测差异表达蛋白蛋白表达结果半定量分析比较各组大鼠回肠组织差异表达蛋白表达水平发现，与健康对照组比较，脾阴虚模型组回肠组织中CAT、Canx、ACO2及Papss2蛋白含量均显著上升（P<0.05），其中以CAT上调的最为显著（P<0.01），而HSP90蛋白含量显著下调（P<0.05）。经理脾阴正方干预后，大鼠回肠组织中CAT、Canx、ACO2及Papss2蛋白含量与模型组相比较均显著下调（P<0.05），而HSP90蛋白的mRNA表达显著上升（P<0.05），但所有蛋白与正常组比较都没有明显差异（P>0.05）。内参β-actin其蛋白含量在各组表达无显著性差异（P>0.05）。结论：1脾阴虚证脾失健运影响机体内的过氧化氢酶、乌头酸水合酶、钙联结蛋白、Papss2及热休克蛋白90的基因及蛋白表达，进而涉及能量代谢、组织构成、细胞信号转导、细胞凋亡和增殖等方面的改变，其中绝大部分与糖、脂类、蛋白质代谢密切相关。2脾阴虚证脾失健运可能存在以线粒体损伤为基础，进一步出现细胞膜过氧化损伤、Ca2+稳态失衡、蛋白质过度硫酸化及能量物质变化的病理机制。