论文部分内容阅读
第一部分 血管内皮生长因子D水平与淋巴管肌瘤病临床特征分析及雷帕霉素疗效的长期观察目的:分析淋巴管肌瘤病(lymphangioleiomyomatosis,LAM)患者血清血管内皮生长因子 D(vascular endothelial growth factorD,VEGF-D)水平与其临床特征的相关性,评估血清VEGF-D对雷帕霉素的治疗反应及其长期疗效观察。方法:回顾性分析2005年10月至2017年11月在北京协和医院注册登记的拟诊/确诊LAM患者,收集基线及长期随访的血清VEGF-D值、肺功能、血气分析、6分钟步行距离(six minute walking distance,6MWD)、Borg呼吸困难指数、圣乔治呼吸问卷(St George’s respiratory questionnaire,SGRQ)、CT 分级等临床资料。结果:符合入选标准的LAM患者390例(散发型368例,结节性硬化症相关22例),基线访视年龄39.3±9.6岁,平均随访2.7±2.3年,VEGF-D基线水平为2754.01 ±2621.16pg/ml。血清VEGF-D水平与乳糜胸、肺一氧化碳弥散量(diffusing capacity of the lungs for carbon monoxide,DLCO)预计值百分比(%pred)、第一秒用力呼气容积(forced expiratory volume in 1 second,FEV1)%pred以及 CT 分级呈弱相关(r=0.392,-0.206,-0.177,-0.177,P<0.05)。390 例 LAM 患者中152例未予雷帕霉素治疗,多次测量的血清VEGF-D值个体波动范围为-35.23%至47.34%;238例接受治疗者平均治疗2.0± 1.6年,与治疗前比,治疗后血清VEGF-D总体水平明显下降并长期维持较低水平(2083.66±2126.44pg/ml vs.3719.55±3298.64pg/ml,P<0.01),平均下降速率为 886.77±189.40pg/ml/年,治疗后SGRQ和6MWD亦显著改善(P<0.01)。此外,治疗前FEV1下降179.79±75.22ml/年,DLCO下降 290.42±156.79mmol/min/kPa/年,治疗期间 FEV1增加28.23±53.94ml/年,DLCO增加 16.90±79.12mmol/min/kPa/年,长期变化趋势显示FEV1和DLCO治疗后3年内维持稳定,3年后均呈现较大幅度下降。血清VEGF-D、FEV1%pred 和 DLCO%pred 变化趋势显示 VEGF-D 与 FEV1%pred、DLCO%pred变化不平行。结论:1、LAM患者血清VEGF-D与其临床特点、肺功能、CT分级呈弱相关性。2、雷帕霉素明显降低LAM患者血清VEGF-D水平,改善或稳定肺功能,并伴随临床症状好转。3、血清VEGF-D与肺功能变化不平行,雷帕霉素可使血清VEGF-D水平持续降低,但本中心数据未显示对肺功能的长期稳定作用。第二部分 基于MicroRNA测序初步探索淋巴管肌瘤病患者血浆潜在生物标志物目的:采用MicroRNA测序初步探索淋巴管肌瘤病(lymphangioleiomyomatosis,LAM)患者血浆miRNA差异表达,并初步分析其生物学功能。方法:收集2017年4月至11月参加LAM注册登记研究的拟诊/确诊的散发型LAM患者,选取无气胸、乳糜胸、肾脏血管肌脂瘤等并发症以及未予雷帕霉素治疗者,为实验组,根据第一秒用力呼气容积(forced expiratory volume in 1 second,FEV1)预计值百分比(%pred)分为 FEV1%pred≥70%和 50%≥FEV1%pred＜70%两个亚组。以健康者为对照组。留取血浆样本行MicroRNA测序。结果:实验组共17例,FEV1%pred≥70%者10例,50%≥FEV1%pred＜70%者7例;对照组10例。均为女性,平均年龄无统计学差异(44.00± 11.08岁vs.42.50±8.83岁,P<0.05)。MicroRNA测序结果显示,与对照组相比,实验组血浆miRNA总共上调53个,下调217个,其中miR-324-3p在FEV1%pred≥70%组下调1.54倍,在50%≥FEV1%pred＜70%组下调更明显,达3.41倍(P<0.01)。三组方差分析示miR-324-3p显著性差异最大(P<0.001)。以上差异miRNA靶基因的基因本体论(geneontology,GO)富集性分析显示,富集在“调节转录”生物过程,“细胞膜”组成成分,“蛋白结合”分子功能的靶基因最多,比例分别为 77.35%,79.36%,90.90%;KEGG 通路富集性分析示,富集在“Pathways in cancer”的靶基因最多,514个,此外mTOR通路富集基因148个(P＜0.01)。针对miR-324-3p靶基因进行KEGG通路分析示,富集在“Pathways in cancer”基因仍最多,16个(P＜0.01),未发现靶基因富集在mTOR通路。蛋白互作示miR-324-3p靶基因中UBC、GAPDH、HSPA8节点最多,分别为54个、50个和49个,在蛋白互作网络图中关联最密切。结论:1、LAM患者血浆中存在大量差异表达miRNA,生物学功能主要参与细胞内信号转导、蛋白结合等,主要涉及癌症相关通路。2、miR-324-3p在LAM中差异表达最显著,主要参与细胞内代谢过程,与mTOR信号通路无明确关联。