【摘 要】
：
研究目的:研究表明肝细胞癌的发病率和死亡率高居不下。受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸激酶4（RIPK4）已经被证实在肿瘤的发展中起到关键作用,但其在肝癌中发挥怎样的生物学功能目前还不完全清楚。我们通过组织、细胞、分子及动物四个层次探索与验证RIPK4在肝细胞癌侵袭转移的生物学功能,与揭示RIPK4在HCC中的生物学作用,并希望探究RIPK4表达与肝细胞癌预后的关系,为HCC患者的临床治疗提供新靶点。方
论文部分内容阅读
研究目的:研究表明肝细胞癌的发病率和死亡率高居不下。受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸激酶4（RIPK4）已经被证实在肿瘤的发展中起到关键作用,但其在肝癌中发挥怎样的生物学功能目前还不完全清楚。我们通过组织、细胞、分子及动物四个层次探索与验证RIPK4在肝细胞癌侵袭转移的生物学功能,与揭示RIPK4在HCC中的生物学作用,并希望探究RIPK4表达与肝细胞癌预后的关系,为HCC患者的临床治疗提供新靶点。方法:首先,我们借用公共数据库中的数据对RIPK4表达情况进行分析,收集了肝细胞癌患者的临床标本进行免疫组化染色和实时定量PCR实验,验证RIPK4的表达情况。其次,我们还借用公共数据库数据分析RIPK4与肝癌患者预后的关系,并结合临床随访数据使用Kaplan-Meier、单因素及多因素风险比例回归模型等方法探究了RIPK4与肝癌患者预后的关系以及临床病理因素之间的关系,不仅如此我们还构建Nomogram模型用来预测肝细胞癌患者预后。接着我们筛选出Huh7与Hep3B细胞系并通过慢病毒感染的方式构建了Huh7-LV-RIPK4与Hep3B-LV-RIPK4稳定转染的细胞系。接下来我们通过细胞功能试验验证其对于肝细胞癌转移能力的影响。此外我们还使用蛋白免疫印迹的方法研究了RIPK4对于STAT3通路的影响,以及RIPK4对于肝细胞癌癌上皮间质转化（EMT）进程的影响。最后我们通过动物实验,构建了体内转移瘤模型,研究RIPK4在体内的作用。结果:（1）通过公共数据库验证在肝细胞癌组织中RIPK4表达水平显著低于正常肝组织。实时荧光定量PCR和免疫组化检测发现临床标本得到相同结果。（2）临床随访数据证实高表达RIPK4患者的总体生存率和无瘤生存率明显高于低表达RIPK4患者（P<0.05）。此外我们结合临床病理学因素发现RIPK4表达水平是肝细胞癌患者OS和DFS的独立危险因素,并且RIPK4的表达与患者微血管浸润呈负相关（χ2=4.795,P<0.05）。（3）通过细胞功能实验,证实RIPK4能够抑制肝癌细胞侵袭转移,Huh7-LV-RIPK4与Hep3B-LV-RIPK4细胞相比对照组表现出了更弱的侵袭转移能力。（4）Western blotting证实RIPK4通过STAT3通路影响肝癌细胞的侵袭转移和EMT进程,通过STAT3通路影响MMP-2与MMP-9蛋白的表达改变侵袭转移能力,通过减少上皮蛋白N-cadherin和Zeb-1改变EMT进程。结合STAT3通路激活剂进行挽救实验的结果证明RIPK4确实通过STAT3通路抑制肝细胞癌的侵袭转移。（5）通过动物小鼠的体内实验,我们发现注射Huh7-LV-RIPK4细胞的小鼠体内肺转移灶明显减少。结论:我们的研究揭示了RIPK4作为差异性表达基因在肝细胞癌组织中表达下调,其下调给肝细胞癌患者带来不良预后。其具体机制是RIPK4抑制了上皮间质转化,并通过减弱STAT3的磷酸化抑制了其侵袭转移。
其他文献
背景:全球变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）患病率约为10%-40%,人数超过5亿,且约25%的AR患者常伴哮喘,我国AR患病率约4%-38%,其差异性与不同地域的环境及经济水平有关。AR症状严重干扰睡眠,导致白天嗜睡和生活质量下降。在对中、重度AR患者的调查中,与轻度AR患者相比,中、重度AR患者的焦虑、抑郁、疲劳、社交障碍和认知功能障碍明显增多。睡眠障碍延伸到患有AR儿童的
教材是重要的课程资源,也是教师进行教学的重要依据。在新课程标准颁布后,国内多家编写团队出版了各具特色的教材,而教材栏目作为课程内容的重要载体,是师生开展教学活动的重要媒介。因此,对教材栏目进行深入地对比分析,有利于广大教师正确认识新版化学教材栏目设置的特点,对全面落实新课程确立的化学核心素养有着积极的促进作用。本研究以2019年6月人民教育出版社的高中化学必修教材和2019年7月山东科学技术出版社
目的:在STZ诱导的1型糖尿病小鼠模型中,维生素D的缺乏会导致角膜上皮损伤愈合延迟,但食物补充维生素D并不能挽回角膜上皮的愈合速率,本文探讨骨化三醇点眼对糖尿病角膜上皮损伤愈合及神经修复的作用。方法:C57BL/6小鼠腹腔注射STZ建立糖尿病模型,检测糖尿病小鼠及同龄正常鼠血糖水平和25（OH）D水平。刮除角膜中央上皮建立角膜上皮损伤模型。实验分组:正常损伤组、糖尿病损伤组、糖尿病损伤+骨化三醇治
目的:抗结核药物连续大剂量应用对肠道微生物稳态及胃肠道耐受性提出挑战,一线抗结核药物为肠道微生物改变的主要驱动因素。本研究拟通过抗结核药物实验及干酪乳杆菌（Lactobacillus casei,L.casei）ATCC334补充实验,探讨抗结核药物（利福平与异烟肼组合、吡嗪酰胺）对肠道菌群及其SCFA产物的影响,进一步研究干酪乳杆菌对肠道微生物和肠道屏障的潜在保护作用,为通过膳食补充辅助改善抗结
目的:使用三维有限元法,基于CBCT扫描图像构建采用不同根管预备方式进行根管治疗后的上颌第二前磨牙牙隐裂模型,模拟口腔中的咬合运动,分析牙体组织、牙周组织以及隐裂纹部分的应力,为牙隐裂的病因研究和治疗方式的选择提供力学理论基础。方法:（1）从2019年7月至2019年10月在青岛大学附属医院口腔影像科就诊患者的CBCT图像中筛选出符合我国标准上颌第二前磨牙牙体测量统计数据的影像资料,以DICOM格
污水处理厂是解决水污染问题的重要方法,随着人均用水量增加,水污染问题越来越严重,近年来污水处理厂也越来越多,但是由于污水处理厂能耗过大,导致许多污水处理厂面临着成本费用不足的问题。在污水处理厂中,泵和鼓风机系统占污水处理厂能耗成本的80%以上。对污水处理厂中的设备进行节能研究,能够提高污水处理的能源利用率,降低污水处理厂运行成本。设备在运行过程中会有不同程度的磨损,而这些磨损会导致设备的运行效率下
目的干眼是一种常见的临床眼表疾病,近年来发病率越来越高。本文旨在探索人脂肪来源干细胞细胞外囊泡（Human adipose mesenchymal stem cells derived extracellular vesicles,h ADSC-Evs）调控眼表炎症,抑制干眼反应的作用及分子机制,研究其在临床转化上的可能性,为临床干眼的防治提供一种新的方法和思路。方法动物实验:将饲养条件设定为恒温
目的评价目前临床常用的胃癌血清肿瘤标志物,并探究外泌体环状RNAs（circular RNAs,circRNAs）作为新型胃癌标志物的潜在价值及临床意义。方法采集260例胃癌患者血清标本作为胃癌组A及140例胃良性疾病患者血清标本作为对照组A,用于评价胃癌血清标志物的诊断价值。采集73例胃癌患者血清标本作为胃癌组B,25例胃良性疾病及30例健康体检者血清标本作为对照组B,用于探究外泌体circRN
缠绕层贴法是一种目前应用较多的轮胎胎面成型方法。与胎面成型中的胎面压出法相比,缠绕层贴法配置了现代化的控制系统与缠绕生产线,比胎面压出法灵活性更好且生产效率更高。随着可视化技术的发展,计算机闭环控制的胎面缠绕层贴法得到了较广泛的应用,但是其缠绕出的胎面一致性差,生产效率低。而开环控制的胎面缠绕层贴法可提高生产效率、保证胎面一致性,但由于胎面缠绕仿真系统多是使用直线和圆弧对缠绕过程中的曲线仿形,缠绕
本实验室前期的工作通过转座子插入突变的方法从中华根瘤菌Sinorhizobiumsp.1128中筛选到了一个自体诱导物合成酶基因traI,它与草木樨中华根瘤菌Sinorhizobium medicae WSM419的LuxI类自体诱导物合成酶（autoinducer synthase）traI的同源性高达99%,将其缺失后发现缺失株仍能产生部分信号分子。而通过基因序列同源性比对分析发现,S.med