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第一部分利用基因芯片探究FOXQ1在结肠癌中的作用目的:探究人结肠癌细胞DLD1在敲低FOXQ1基因前后m RNA和microRNA的表达改变。方法:提取DLD1-shFOXQ1 和 DLD1-shControl两组细胞的RNA,分别与Whole Human Genome Oligo Microarray (4×44 K, Agilent Technologies)全基因组表达谱芯片和miRCURYTM LNA Array (v.18.0, Agilent Technologies) MicroRNA芯片进行杂交,应用GeneSpring、Genepix软件对芯片结果进行统计,对全基因组表达谱芯片进行GO、Pathway分析,对全基因组表达谱芯片和microRNA芯片结果进行关联分析,并应用qRT-PCR对部分结果进行验证。应用Microsoft Excel 和 SPSS17.0软件进行统计学分析。结果:全基因组表达谱的检测结果表明,敲低FOXQ1基因后,在芯片所涵盖的41093个基因中,以|FC|≥2作为具有显著性差异标准,共有255个基因上调,176个基因下调。QRT-PCR的验证结果与全基因组表达谱芯片的结果基本相符。MicroRNA芯片的检测结果表明,经敲低FOXQ1基因后,以|FC|≥2作为具有显著性差异标准,共有31个microRNA上调,12个microRNA下调。表明FOXQ1在结肠癌的发生和发展过程中,与细胞因子-细胞因子受体等途径存在密切关系。同时发现在结肠癌细胞系DLD1中,microRNA-208b-3p、microRNA-320d可能作为FOXQ1的上游,负向调控了FOXQ1的表达。结论:本研究了解了FOXQ1基因敲低前后mRNA和MicroRNA的表达改变,为后续FOXQ1在结肠癌的发生发展中的作用机制研究提供了重要的线索和实验依据。第二部分利用双荧光素酶报告系统探究FOXQ1在结肠癌中直接转录激活的靶基因目的:检测人结肠癌细胞DLD1中,FOXQ1直接转录激活的靶基因。方法:利用信息生物学JASPAR等工具进行FOXQ1靶位点的预测,构建含HBEGF、PDGFβ、PDGFRβ、PLAT、IL1β5个基因启动子区域的萤火虫荧光质粒PGL3-enchancer,与 PRL-TK共转染shFOXQ1-DLD1 和 shcontrol-DLD1细胞,检测荧光强度改变以确定FOXQ1是否直接转录激活这五个基因。结果:分别成功构建了含HBEGF、PDGFβ、PDGFRβ、PLAT、IL1β 5个基因启动子区域的萤火虫荧光质粒,证明在大肠癌细胞DLD1 中 FOXQ1并未直接靶向激活HBEGF、PDGFβ、PDGFRβ、PLAT、IL1β基因的转录。结论:FOXQ1未直接转录激活HBEGF、PDGFβ、PDGFRβ、PLAT、IL1β 5个基因。