应用表达谱芯片和荧光素酶报告系统筛选并鉴定大肠癌FOXQ1基因的潜在下游靶基因

来源 :昆明理工大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:lanshuye6
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
第一部分利用基因芯片探究FOXQ1在结肠癌中的作用目的:探究人结肠癌细胞DLD1在敲低FOXQ1基因前后m RNA和microRNA的表达改变。方法:提取DLD1-shFOXQ1 和 DLD1-shControl两组细胞的RNA,分别与Whole Human Genome Oligo Microarray (4×44 K, Agilent Technologies)全基因组表达谱芯片和miRCURYTM LNA Array (v.18.0, Agilent Technologies) MicroRNA芯片进行杂交,应用GeneSpring、Genepix软件对芯片结果进行统计,对全基因组表达谱芯片进行GO、Pathway分析,对全基因组表达谱芯片和microRNA芯片结果进行关联分析,并应用qRT-PCR对部分结果进行验证。应用Microsoft Excel 和 SPSS17.0软件进行统计学分析。结果:全基因组表达谱的检测结果表明,敲低FOXQ1基因后,在芯片所涵盖的41093个基因中,以|FC|≥2作为具有显著性差异标准,共有255个基因上调,176个基因下调。QRT-PCR的验证结果与全基因组表达谱芯片的结果基本相符。MicroRNA芯片的检测结果表明,经敲低FOXQ1基因后,以|FC|≥2作为具有显著性差异标准,共有31个microRNA上调,12个microRNA下调。表明FOXQ1在结肠癌的发生和发展过程中,与细胞因子-细胞因子受体等途径存在密切关系。同时发现在结肠癌细胞系DLD1中,microRNA-208b-3p、microRNA-320d可能作为FOXQ1的上游,负向调控了FOXQ1的表达。结论:本研究了解了FOXQ1基因敲低前后mRNA和MicroRNA的表达改变,为后续FOXQ1在结肠癌的发生发展中的作用机制研究提供了重要的线索和实验依据。第二部分利用双荧光素酶报告系统探究FOXQ1在结肠癌中直接转录激活的靶基因目的:检测人结肠癌细胞DLD1中,FOXQ1直接转录激活的靶基因。方法:利用信息生物学JASPAR等工具进行FOXQ1靶位点的预测,构建含HBEGF、PDGFβ、PDGFRβ、PLAT、IL1β5个基因启动子区域的萤火虫荧光质粒PGL3-enchancer,与 PRL-TK共转染shFOXQ1-DLD1 和 shcontrol-DLD1细胞,检测荧光强度改变以确定FOXQ1是否直接转录激活这五个基因。结果:分别成功构建了含HBEGF、PDGFβ、PDGFRβ、PLAT、IL1β 5个基因启动子区域的萤火虫荧光质粒,证明在大肠癌细胞DLD1 中 FOXQ1并未直接靶向激活HBEGF、PDGFβ、PDGFRβ、PLAT、IL1β基因的转录。结论:FOXQ1未直接转录激活HBEGF、PDGFβ、PDGFRβ、PLAT、IL1β 5个基因。
其他文献
随着经济结构和企业所有制结构的调整,国有、集体企业改革改制进程加快,私营、民营企业迅猛发展,外商投资企业不断增多,企业劳动关系复杂多变,这使我国新时期劳动争议呈现出新的特
本文研究了具有响应频率快、亮度高、着火电压低以及成本低等特点的新型槽型结构等离子体平板显示放电单元的放电特性 ,并与传统的表面放电结构进行了比较 .给出了不同时刻两
目的:建立高效液相色谱法测定四物颗粒中阿魏酸含量的方法。方法:色谱柱为Agilent C_(18)(TC)(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸(30:70),流速为0.8ml·min~(-1),检
文学的时间和空间研究的一个重要课题是空间意象结构。洛特曼在《艺术文本结构》中说:“由于艺术中的符号具有特殊的图象性质,结构成分的空间关系是富具意义的,它直接与内容
目的:探讨电针对睡眠剥夺大鼠的体重的影响,观察针灸的抗睡眠剥夺作用。方法:健康SD大鼠30只,随机分为正常对照组(简称正常组)10只,模型对照组(简称模型组)10只,电针加模型组
目的分析乳腺癌中ERα、PR的表达与临床病理特征的关系及ERα阳性并接受内分泌治疗的乳腺癌中PR不同表达水平的临床病理特征;比较不同阳性细胞百分率的ERα、PR与预后的关系;探
数字化和信息化时代的来临,使得普通大众与网络虚拟财产的关系日益密切,涉及网络虚拟财产的诉讼案件呈爆发式增长。一方面,这令网络虚拟财产评估的需求日益增长;另一方面,评
我国药品监督工作经过60多年的不断发展,经过几代药监工作者的不懈努力,已逐步形成了国家、省、地市、县四级药品监督体系和一套较系统的药品检验工作程序。本文主要对我国药
为了更好地推广南粳9108,并且在实际栽培过程中,做到质量与产量的双赢,文章设计了穗肥最佳用量指导生产。