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第一章：MPO基因多态性与冠心病易感性的Meta分析研究背景冠心病(coronary artery disease,CAD)是全世界范围内发病率第一位的心血管疾病。在中国,由于危险因素如肥胖、高血压、高脂血症、糖尿病的盛行,使得CAD发病率迅速上升。虽然冠心病的发生机制非常复杂,但各种病理因素导致的炎症及氧化应激反应越来越受到广大医学者的重视。髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)是由活化的中性粒细胞、单核细胞、组织巨噬细胞分泌的一种血红素蛋白,能生成活性氧簇,在免疫系统和炎症调节中发挥重要作用,涉及很多疾病进程。国内外研究均已证明血浆MPO水平与冠状动脉粥样硬化性心脏病,即CAD的发生、发展密切相关。MPO基因-463位点和-129位点存在单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP),可以对MPO的表达及活性进行调控。进而,一些学者对MPO-基因多态性与CAD易感性的相关性进行研究,但结果不一。一些研究报道MPO基因中A等位基因可降低CAD患病风险,但是另一些研究却发现MPO基因多态性与CAD的发生无关。因此MPO基因多态性是否会增加CAD的易感性,目前尚无定论。本项研究通过检索所有相关性研究,利用Meta分析的方法,明确MPO基因多态性和冠心病易感性是否有关,从而加深冠心病病因的了解,为冠心病预防和治疗提供新的方向。方法利用“髓过氧化物酶”、“MPO”、“基因多态性”、“冠心病”、“CAD”、“CHD”为关键词,检索CNKI、万方、Pubmed、Web of SCI数据库从建库到2013年3月期间在公开刊物上发表的相关性研究。通过Stata12.0软件用固定效应或随机效应模型合并相对危险度(odds ratio,OR值)及其95%可信区间(confidence interval,CI)。应用亚组分析来进一步探讨研究间异质性的可能来源。通过Begg’s漏斗图和Egger’s线性回归图对各研究的发表偏倚进行检测。结果共纳入17篇文献,共包括3962冠心病患者和3407病例对照,Meta分析显示各基因型合并后的OR值及95%CI。针对MPO-463G/A基因多态性位点,共纳入文献15篇,共3449例冠心病患者,3082例健康对照者,A等位基因在CAD患者中的频率为0.213,对照组人群中为0.265。A等位基因与G等位基因比较,OR=0.58,95%CI (0.47-0.72)。基因型GG在CAD患者中的基因型频率为0.61,在健康对照组中的基因型频率为0.55。基因型AA+AG与GG比较,OR=0.58,95%CI(0.46-0.72)。在欧洲人群亚组中,AA+AG对GG的OR=0.79,95%CI(0.58-1.08)；在稳定型心绞痛亚组中,A对G的OR=0.45,95%CI(0.15-1.37)；AA+AG对GG的OR=0.57,95%CI(0.19-1.65)。针对MPO-129G/A基因多态性位点,共纳入文献3篇,共1535例CAD患者,1655例健康对照者,文献中未给出等位基因分布数值,只给出了基因型分布情况,GG基因型在CAD患者中的基因型频率为0.84,在健康对照组中的基因型频率也为0.84,GG对AA+AG的OR=0.91,95%CI(0.74-1.10)。结论人类MPO-463G/A基因多态性位点上A等位基因可降低人群冠心病的发病风险,MPO-129G/A基因多态性位点与冠心病易感性无相关性。第二章MPO对血管舒张功能的影响研究背景髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)是存在于中性粒细胞、单核细胞及巨噬细胞中中的一种过氧化物酶,也是中性粒细胞中高表达的一种血红素蛋白酶,约占中性粒细胞蛋白含量的5%,被认为是人类宿主免疫的重要组成部分。研究表明,MPO在冠心病患者血浆中表达显著升高,是冠心病二级预防的生化标记物。同时,在动脉粥样斑块中也可被检测,参与斑块动态变化及血管病理生理过程。此外,还可以根据患者体内MPO水平对患者病情进行分级。以上均说明,MPO与冠状动脉粥样硬化性心脏病密切相关。而MPO同时被证实是一种血管舒张因子一氧化氮(notric oxide,NO)代谢酶。生理情况下,MPO在协同底物H2O2存在条件下,能催化消耗NO,调节其生物活性平衡。在病理状态下,过多生成的过氧化物能直接与NO反应形成过氧亚硝酸盐,或者在氧化酶的催化下,NO被氧化成亚硝酸盐,从而导致NO生物活性降低。MPO来源的HC10亦可氧化修饰生成NO的L-精氨酸,通过降低底物浓度,直接影响NO的生成。目前已经公认,NO生成及灭活异常是各种病理因素导致内皮功能不全,以及血管舒张功能障碍的主要原因。综上所述,我们有理由推测MPO在CAD中的作用可能与其调节NO代谢促血管功能障碍有关。本项研究通过三部分实验,探讨髓过氧化物酶对内皮依赖及非内皮依赖性血管舒张功能的影响方法本实验分为三个部分：1)MPO对内皮依赖性血管舒张功能的影响；2)MPO对非内皮依赖性血管舒张功能的影响；3)低分子肝素改善MPO诱导的血管舒张功能障碍。离体SD大鼠胸主动脉环,应用苯肾上腺素(Phenylephrine, PE)预收缩血管,观察血管环对促内皮来源NO生成的乙酰胆碱(Acetylcholine, Ach)、外源性NO供体硝普钠(Sodium Nitroprusside, SNP)的舒张反应；观察应用MPO预孵育血管环组织后,Ach和SNP舒血管效应的变化；观察血管环随Ach浓度改变的舒张反应；观察应用MPO孵育、MPO+低分子肝素(Low Molecular Heparin, LMWH)孵育后,血管环随Ach浓度改变的舒张反应的变化。结果1)MPO可损伤乙酰胆碱诱导的内皮依赖性血管舒张效应2)MPO可降低外源性NO供体SNP所致的非内皮功能依赖性血管舒张作用3) LMWH可减少MPO所致的血管内皮功能障碍结论MPO可降低乙酰胆碱诱导的内皮依赖性及外源性NO供体硝普钠所诱导的非内皮依赖性血管舒张作用,从而导致血管功能障碍