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目的:应用不同浓度酒精处理人肝L02细胞,观察酒精对细胞的损伤作用及氧化应激改变,探讨p62/Nrf2信号途径参与此过程时相关的作用机制。方法:应用MTT法检测L02细胞增殖率及各种因素对细胞生存的影响;应用RNA干扰法下调细胞内p62的表达,RT-PCR法检测p62 siRNA对L02细胞内p62 mRNA表达量的影响,蛋白免疫印迹法(Western-Blot)检测L02细胞内p62蛋白表达量;利用细胞核蛋白与细胞质蛋白抽提试剂盒分离细胞质和细胞核蛋白,Western-Blot法检测Nrf2在细胞质和细胞核中的表达量;DCFH-DA染色荧光显微镜观察与流式细胞术检测L02细胞内活性氧水平;比色法检测L02细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性;羟胺法检测L02细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:1.不同浓度酒精对肝L02细胞生存率的影响。L02细胞在酒精浓度分别为mmol/L 50、mmol/L 100、mmol/L 200、mmol/L 400和mmol/L 800的无血清培养基中培养24 h,与0 mmol/L酒精组相比,细胞生存率分别为80.42%(P<0.05)、65.09%(P<0.01)、48.25%(P<0.01)、41.87%(P<0.01)、37.54%(P<0.01),表明细胞生存率随酒精浓度升高而减少。2.P62 siRNA对L02细胞生存率的影响。200 mmol/L+p62 siRNA组细胞生存率显著低于200 mmol/L酒精处理组(P<0.05),而0 mmol/L+p62 siRNA组细胞生存率与0 mmol/L组相比无显著差别。3.酒精及p62 siRNA对L02细胞内活性氧水平的影响。DCFH-DA染色法荧光显微镜结果显示:与0 mmol/L组相比,200 mmol/L酒精组细胞内活性氧水平明显升高。200 mmol/L+p62 siRNA组细胞内活性氧水平明显高于200mmol/L酒精处理组。流式细胞术结果显示:与0 mmol/L组相比,200 mmol/L酒精组细胞内活性氧水平显著升高(P<0.01)。200 mmol/L+p62 siRNA组细胞内活性氧水平显著高于200 mmol/L酒精处理组(P<0.01)。两种方法均显示0 mmol/L+p62 siRNA组细胞内活性氧水平与0 mmol/L组相比无显著差别。4.酒精及p62 siRNA对L02细胞内Nrf2表达量及分布的影响。与0 mmol/L酒精组相比,200 mmol/L酒精组细胞胞质内Nrf2水平显著降低(P<0.01),胞核内Nrf2水平显著升高(P<0.01)。200 mmol/L+p62 siRNA组细胞胞质内Nrf2水平显著高于200 mmol/L酒精处理组(P<0.01),胞核内Nrf2水平显著低于200 mmol/L酒精处理组(P<0.01)。而0 mmol/L+p62 siRNA组细胞胞质与胞核内Nrf2水平与0 mmol/L组相比均无显著差别。5.酒精及p62 siRNA对L02细胞内SOD和GSH-PX活性的影响。与0 mmol/L酒精组相比,200 mmol/L酒精组细胞内SOD和GSH-PX活性显著增强(P<0.01)。200 mmol/L+p62 siRNA组细胞内SOD和GSH-PX活性均显著低于200mmol/L酒精处理组(P<0.01)。而0 mmol/L+p62 siRNA组细胞内SOD和GSH-PX活性与0 mmol/L组相比均无显著差别。结论:酒精能显著降低人肝L02细胞生存率,使细胞内活性氧水平显著提高,对细胞产生氧化应激损伤,诱导细胞抗氧化应激转录因子Nrf2的表达和细胞核转位。该作用受p62蛋白的调控,与p62/Nrf2信号途径有关,并通过p62/Nrf2信号途径对细胞产生保护作用。