研究目的喉癌是耳鼻咽喉头颈外科第三大恶性肿瘤,病理类型以喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）为主。由于早期症状不明显,患者就诊时往往处于中晚期,从而错过最佳治疗时期。尽管在手术、放疗及化疗等治疗方法上已取得较大进展,但喉癌患者总体存活期未见明显提高,且生活质量欠佳。因此,寻找新型、安全高效的特异性喉癌标志物显得十分重要。转移RNA（transfer RNA,tRNA）是将遗传信息翻译成蛋白质一级结构的接头分子,在基因表达过程中发挥重要作用。tRNA在所有生命形式都普遍存在,曾一度被当作是一种基本没有调控功能的管家基因。但最近许多研究表明,tRNA在肿瘤中失调,并影响了肿瘤细胞的增殖、迁移能力。tRNA在肿瘤中的调控作用近年来逐渐成为新的研究热点。本研究先建立LSCC中tRNA的表达谱,筛选出相关tRNA后,分析其在LSCC患者肿瘤组织及术前术后血浆中的表达情况,并分析其诊断价值。进一步通过体外、体内实验,探索上调tRNA表达水平对LSCC发生发展进展的影响。研究方法1.收集37例LSCC患者手术切除的肿瘤组织及癌旁组织标本,收集62例LSCC患者术前1天血浆、24例术后7天血浆以及53例健康志愿者血浆标本。2.通过基因芯片技术建立LSCC中的tRNA表达谱。3.结合tRNA表达谱,筛选tRNACATIni为研究目标。4.通过qRT-PCR技术检测tRNACATIni在LSCC组织及血浆中的表达水平并分析其诊断价值。5.构建上调tRNACATIni的慢病毒载体,并转染至LSCC细胞系AMC-HN-8,荧光显微镜及实时荧光定量PCR分别检验转染效率和效果。6.通过~3H-Td R渗入试验、流式细胞术检测上调tRNACATIni对LSCC细胞增殖、周期及凋亡的影响。7.运用LSCC裸鼠原位移植瘤模型分析上调tRNACATIni对LSCC移植瘤的影响。8.剥离移植瘤作HE病理检查和透射电子显微镜观察肿瘤细胞形态学的改变。研究结果1.表达谱研究结果表明,LSCC组织与癌旁组织中tRNA的表达水平存在差异,其中tRNACATIni在LSCC中低表达且差异倍数为2.24。2.实时荧光定量PCR结果显示,tRNACATIni在LSCC组织中低表达,在术前血浆中低表达。tRNACATIni在组织和血浆中的受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic,ROC）下面积（the area under the ROC curve,AUC）分别为0.717和0.808。提示tRNACATIni可作为LSCC新型生物标志物。3.在LSCC细胞株上调tRNACATIni后,~3H-Td R渗入试验显示细胞增殖能力下降;流式细胞实验显示细胞周期无影响,而明显促进了细胞凋亡。4.LSCC裸鼠原位移植瘤模型的数据表明,上调tRNACATIni后抑制移植瘤生长。5.HE病理检查和透射电子显微镜显示,上调tRNACATIni后促进了移植瘤的凋亡和自噬。研究结论LSCC组织与癌旁组织中的tRNA表达谱存在差异,tRNACATIni在LSCC组织和血浆中低表达,具有一定的临床诊断价值。细胞实验显示,tRNACATIni能抑制细胞增殖并促进凋亡,裸鼠实验显示,tRNACATIni抑制肿瘤生长并促进凋亡。总之,tRNACATIni可作为LSCC新型标志物,并可能在LSCC中发挥着抑癌功能。