论文部分内容阅读
目的探讨微小RNA-16(microRNA-16, miR-16)调控人上皮性卵巢癌细胞skov-3增殖、侵袭及凋亡的作用及机制,以及在人卵巢癌顺铂耐药细胞skov-3/DDP中的表达及其与铂类药物敏感性的关系。方法脂质体lipofectamine2000介导miR-16成熟体模拟物(mimics)及相应的阴性对照片段(negative control RNA, NC)分别转染人卵巢癌细胞株及顺铂耐药细胞株。实时荧光定量PCR检测细胞中miR-16的表达；蛋白印迹法检测细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、凋亡抑制基因(B-cell lymphoma2,Bcl-2)蛋白、原癌基因c-myc蛋白的表达；多种方法测定细胞的增殖侵袭能力；四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的顺铂半数抑制浓度；caspase-3活性检测试剂盒检测细胞内caspase-3酶的活性；流式细胞术检测血清饥饿及低氧条件下细胞的凋亡情况。结果(1)转染1niR-16mimics后skov-3细胞中miR-16水平明显高于转染NC后的细胞(P<0.01)；(2)转染niR-16mimics后skov-3细胞中VEGF、MMP-2及Bcl-2蛋白的相对表达量均明显低于转染NC后skov-3细胞(P<0.01)；(3)miR-16显著抑制skov-3细胞的增殖及侵袭能力(P<0.05)；(4)血清饥饿及低氧条件培养24h后,转染miR-16mimics后skov-3细胞的凋亡率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)；培养48h后,转染miR-16mimics后skov-3细胞的总凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P=0.001)。(5)skov-3/DDP细胞中miR-16表达水平明显低于skov-3细胞,约为后者的1/10(P=0.000),转染miR-16mimics后skov-3/DDP细胞中miR-16水平升高约660倍(P=0.001)；(6)skov-3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量较skov-3细胞明显升高,转染miR-16mimics后skov-3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量明显降低(P<0.01)；(7)skov-3/DDP细胞转染miR-16mimics后,顺铂半数抑制浓度(14.19±0.06)较转染NC细胞(22.52+0.60)明显降低(P=0.002),且顺铂作用后caspase-3的酶活力单位也明显升高(P=0.000)；(8)顺铂(20ug/ml)作用24h或48h后,skov-3组凋亡率明显高于skov-3/DDP组,转染miR-16mimics的skov-3/DDP细胞凋亡率约为转染NC细胞的1.5倍(P<0.01)。结论(1)miR-16能够下调上皮性卵巢癌细胞VEGF、MMP-2及Bcl-2蛋白的表达,抑制细胞增殖侵袭能力,增强其对凋亡刺激的敏感性；(2)miR-16能够靶向下调上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞Bcl-2蛋白的表达,并协同调节c-myc蛋白的表达,增强卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,发挥逆转耐药的作用。