背景与目的由于当前社会的不断进步与发展以及人民生活水平的改善与提高,人口老龄化的趋势使得脑血管疾病的发病率逐年升高,而现代人高糖、高脂、高盐的饮食方式及快节奏的生活方式又使得脑血管疾病患者不断年轻化。在中国,中老年人死亡原因中脑血管疾病占居第一、第二位,而其致残率也居高不下,使得脑血管疾病成为我国当今不得不重视的疾病之一。而脑血管疾病的常见类型慢性脑缺血引起的阿尔茨海默病(AD)、血管性痴呆(VD)、Binswager等神经系统变性性疾病,严重影响了患者的生活质量,给个人、家庭和社会增加了巨大的经济负担及长期的精神心理压力,因此,积极开展慢性脑缺血的防治工作已成为迫切需要解决的医学和社会问题。慢性脑缺血是指长期脑血流灌注不足引起的一种常见的病理状态,慢性脑组织缺血缺氧可使得神经元凋亡、胶质细胞增生、自由基清除障碍、炎症反应发生等,最终导致持久性或者进展性的神经功能障碍。海马的主要功能包括学习记忆能力,富含谷氨酸能突触,由于结构的特殊精巧性使其成为全脑缺血的敏感区域。而认知功能与突触的可塑性密切相关,神经细胞突触传递结构的改变可引起认知功能改变,树突棘构成大部分兴奋性突触的突触后膜,是主要的信息加工及储存的场所,树突棘的数目和长度可以反映出锥体细胞间的信息联系及传递程度。EphB2可通过调节突触可塑性,促进树突棘的成熟,从而影响学习记忆能力。骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植可以改善AD等神经系统疾病所致的认知功能障碍,可促进受损神经元的突触再生及连接,其移植改善慢性脑缺血性疾病认知障碍的研究日渐增多,但其作用机制却不清楚。本实验拟采用2VO模型大鼠,尾静脉注射骨髓间充质干细胞,应用水迷宫、免疫组化和Western-blot观察BMSCs移植后对慢性脑缺血大鼠认知功能及海马区EphB2的影响。材料与方法从郑州大学实验动物中心随机购买健康雄性SD大鼠72只,体重在450g左右,约6月龄。将大鼠随机平均分为假手术组、模型组和实验组,选取8、10、12周三个时间点观察。健康雄性SD大鼠,60-80g,用于骨髓间充质干细胞取材培养。慢性脑缺血模型的制备方法为永久性双侧颈总动脉结扎术。造模成功后1周,实验组进行鼠尾静脉注射第5代骨髓间充质干细胞2×106个(混匀于1mlPBS内),其余各组同一时间鼠尾静脉注射1mlPBS。在指定时间点行水迷宫实验,以评价检测大鼠的学习记忆能力,并在水迷宫实验后相应时间点处死各组大鼠,行免疫组织化学法、Western-blot观察海马区EphB2的表达,采用SPSS17.0软件进行统计学分析。标记有GFP的慢病毒转染P5代细胞后继续培养2-3天,共聚焦荧光显微镜下观察。取标记后的细胞2×106个混匀于1mlPBS内,于造模1周后鼠尾静脉注射,移植后1周,快速断头取脑,选择海马区域冰冻切片后共聚焦荧光显微镜下观察细胞是否移植入脑内。结果1.BMSCs移植结果BMSCs可通过鼠尾静脉注射移植入2VO模型鼠脑内。2.水迷宫测试结果假手术组3个时间点逃避潜伏期无明显变化(P>0.05)。组间比较,同一时间点,模型组和实验组的逃避潜伏期均较假手术组明显延长(P<0.05),实验组逃避潜伏期较模型组明显缩短(P<0.05),。3.免疫组织化学检测结果同一时间点,模型组和实验组EphB2表达的阳性细胞数较假手术组明显减少(P<0.05),实验组较模型组明显增多(P<0.05)。4. Western blot检测结果同一时间点,模型组和实验组EphB2表达较假手术组明显减少(P<0.05),实验组EphB2表达量较模型组明显增多(P<0.05)。结论BMSCs可通过静脉注射移植入2VO模型鼠脑内,并明显改善慢性脑缺血大鼠的学习记忆能力,其可能是通过影响EphB2的表达从而改善认知功能障碍。