大黄鱼(Larimichthys crocea)是我国海水养殖的重要经济鱼类之一,因其营养丰富、肉质鲜美一直受到消费者的青睐。但是近年来,随着养殖规模的不断扩大,大黄鱼产业结构的升级与发展,大黄鱼的病害已成为制约大黄鱼养殖产业发展的主要屏障。大黄鱼“内脏白点病”是近年影响大黄鱼养殖的重要细菌性疾病。本研究通过人工回感实验,运用组织病理切片与免疫组化技术观察了大黄鱼“内脏白点病”病原——杀香鱼假单胞菌在大黄鱼体内的分布情况;对杀香鱼假单胞菌的溶血素共调节蛋白基因Hcp进行克隆、表达,并获得了以包涵体形式的重组蛋白Hcp,通过蛋白复性后成功获得可溶性蛋白,可运用于杀香鱼假单胞菌T6SS分泌系统中溶血素共调节蛋白Hcp深层研究。对健康大黄鱼进行杀香鱼假单胞菌人工感染试验,结果大黄鱼表现出了典型的“内脏白点病”的症状:病鱼无活力,反应迟钝。解剖发现脾、肾脏、肝脏等内部器官上长满白点,并伴随腹水症状。对发病鱼进行组织病理观察,发病鱼肝、脾、肾等内脏组织都出现明显损伤,表现出不同程度的充血、出血、坏死等,随着菌体在大黄鱼体内大量增殖,大黄鱼全身多器官组织的细胞出现坏死溶解,最终导致感染鱼因多组织器官的功能衰竭而死亡。免疫组化试验结果显示,在病鱼的肝、脾、肾和鳃丝各相关组织器官中都出现了特征性的阳性信号,这些阳性信号主要分布于肝血窦、脾间质或巨噬细胞、肾间质活巨噬细胞以及腮丝的巨噬细胞内,表明杀香鱼假单胞菌对机体多组织、器官都具有侵染性。运用分子生物学技术克隆、表达了杀香鱼假单胞菌分泌系统T6SS中的溶血素共调节蛋白Hcp。PCR扩增结果显示Hcp大小约为490bp,相对蛋白质分子量约为25kDa,pET-30a-Hcp的重组蛋白主要以包涵体形式表达。对纯化后的包涵体蛋白进行复性,Western-blot结果显示pET-30a-Hcp重组蛋白可与多抗进行较好地结合;本研究为进一步研究杀香鱼假单胞菌的致病机理以及其T6SS中的溶血素共调节蛋白Hcp奠定了基础。