【摘 要】
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目的:胃癌（gastric cancer,GC）因其发病率高,死亡率高,治疗效果不甚理想等特点,成为当今肿瘤研究的热点。目前,临床上治疗GC主要有手术、放疗和化疗等手段,但是它们均有一定的局限性。中草药在辅助GC的治疗过程中起着重要的作用,可以增加疗效,降低放、化疗副作用,增强免疫力。地皮菜早在古籍医书中便有记载,具有“明目、益气”、“补心、清胃”等重要功效,具有一定的药用价值。其中含量最高的水应
【基金项目】
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山西省科技成果转化引导专项项目“地皮菜 WSP 抗 GC 机制应用临床的转化推广（编号:201904D131028）”；
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目的:胃癌（gastric cancer,GC）因其发病率高,死亡率高,治疗效果不甚理想等特点,成为当今肿瘤研究的热点。目前,临床上治疗GC主要有手术、放疗和化疗等手段,但是它们均有一定的局限性。中草药在辅助GC的治疗过程中起着重要的作用,可以增加疗效,降低放、化疗副作用,增强免疫力。地皮菜早在古籍医书中便有记载,具有“明目、益气”、“补心、清胃”等重要功效,具有一定的药用价值。其中含量最高的水应激蛋白（water stress protein,WSP）,已被证实具有一定的抗肿瘤功效。为了探究地皮菜WSP对于GC作用效果,我们从其抗GC迁移能力入手,探究其作用位点及分子机制;之后通过动物实验,对WSP的体内抗GC转移能力进行评估,以期为后续WSP的开发利用奠定研究基础。方法:1.采用丙酮沉淀法以及硫酸铵分级沉淀法提取WSP,应用基因工程对WSP进行诱导表达纯化,使用聚丙烯酰氨凝胶电泳检测所制备蛋白分子量。2.培养SGC-7901、BGC-823和MKN-28细胞,借助划痕实验观察WSP的抗GC迁移能力。3.采用免疫共沉淀验证WSP与EGFRv Ⅲ相互作用,比较SGC-7901、BGC-823和MKN-28三种细胞系EGFRVⅢ表达。4.敲低SGC-7901的EGFRVⅢ,使用q PCR和Western blot法检测敲低效果,并通过划痕实验观察EGFRv Ⅲ敲低后WSP的抗GC迁移能力变化。5.建立裸鼠腹腔转移模型,通过比较WSP注射组与未注射组裸鼠的肝转移瘤数目,体内验证WSP的抗GC转移能力。结果:1.通过丙酮沉淀法和原核表达系统成功制备WSP,经聚丙烯酰氨凝胶电泳验证其蛋白分子量为35KD。2.通过划痕实验,观察到WSP抑制了GC的迁移。当WSP浓度达到0.3μg/μL,对SGC-7901、BGC-823和MKN-28细胞均有显著的抗迁移能力（P＜0.05）;当WSP为0.05μg/μL时,对SGC-7901细胞仍具显著抗迁移能力（P＜0.05）。3.免疫共沉淀显示WSP可以与膜受体蛋白EGFRv Ⅲ相互作用,通过比较三种胃癌细胞系EGFRVⅢ的m RNA表达和蛋白表达,发现SGC-7901的EGFRVⅢ的m RNA显著高于BGC-823和MKN-28细胞（P＜0.05）。4.使用si-RNA干扰后,Western blot和q PCR验证EGFRVⅢ表达量显著减少,划痕实验观察到EGFRv Ⅲ敲低后WSP处理组抗GC迁移能力对比未处理组无明显差异（P＞0.05）。5.动物实验中,与未注射组相较,WSP（30μg/g）组和WSP（60μg/g）组治疗后裸鼠肝转移瘤数目显著减少（P＜0.05）。结论:WSP可抑制GC迁移,此抑制作用是通过EGFRv Ⅲ所介导的。在裸鼠体内,WSP同样具有抗GC转移能力,为WSP的抗胃癌研究和进一步开发适用于胃癌患者的蛋白药物提供参考依据。
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