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本试验系统地研究了以低毒性的乙二醇为主体，添加葡聚糖和海藻糖配制成的EDT玻璃化溶液(EDT30，EDT40)，在室温(25℃)下对小鼠体内受精的单细胞胚(受精卵)、桑椹胚和囊胚进行的一步法和二步法的玻璃化冷冻保存。目的在于为乙肝病毒表面抗原(HBsAg)转基因鼠胚胎和珍奇动物、濒危动物胚胎冷冻保存提供研究方法。 在抗冻保护剂溶液的玻璃化与脱玻璃化试验中，证明了乙二醇、葡聚糖和海藻糖配制玻璃化溶液的可行性。抗冻保护剂溶液对桑椹胚的毒性试验证明，25℃下，胚胎在葡聚糖和海藻糖溶液中平衡5-20分钟，对其体外发育无不良影响。EDT玻璃化溶液的毒性来自于乙二醇，并随着乙二醇浓度的增加和平衡时间的延长而增加。 在受精卵的玻璃化冷冻试验中，在各实验组中发育率最好的是EDT30一步法2分钟平衡组(63％)、EDT30二步法1分钟平衡组(66％)、EDT40一步法1分钟平衡组(53％)、EDT40二步法1分钟平衡组(55％)，与对照组(100％)相比有极显著差异(p<0.01)。 在桑椹胚的玻璃化冷冻试验中，各实验组中发育率最好的是EDT30一步法1分钟平衡组(93％)、EDT30二步法1分钟平衡组(94％)、EDT40一步法1分钟平衡组(92％)、EDT40二步法0.5分钟平衡组(94％)，与对照组(98％)相比无显著差异(p>0.05)。 在囊胚的玻璃化冷冻试验中，各实验组中解冻后体外培养24小时发育率最好的是EDT30一步法1分钟平衡组(90％)、EDT30二步法1分钟平衡组(91％)、EDT40一步法1分钟平衡组(91％)、EDT40二步法0.5分钟平衡组(89％)，与对照组(100％)相比无显著差异(p>0.05)；培养48小时的孵化率分别为48％、50％、49％和51％，与对照组(88-90％)相比有极显著差异(p<0.01)。 在玻璃化冷冻效果最好组胚胎的子宫移植试验中，冷冻受精卵、桑椹胚和囊胚的妊娠受体率、妊娠受体产仔率和移植受体产仔率均与对照组无明显差异(p>0.05)，表明EDT玻璃化冷冻液是低毒性、高效的，对冻胚的体内发育无不良影响。 总之，我们的研究表明，DET玻璃液冷冻方法是简单、经济而又高效的，冷冻小鼠各阶段胚胎都能获得较高的存活率，其中受精卵的EDT30二步法1分钟平衡组(66％)、桑椹胚的EDT30二步法1分钟平衡组(94％)和EDT40二步法0.5分钟平衡组(94％)、囊胚的EDT30二步法1分钟平衡组(91％)和EDT40一步法1分钟平衡组(91％)冷冻效果最好。