论文部分内容阅读
目的：探讨4-HPR微泡联合超声治疗的裸鼠瘢痕疙瘩模型中TGF-β/Smads通路的作用。 方法： 1.包载4-HPR的胶束和微泡的制备：使用聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺（PEG-DSPE）和蛋黄磷脂酰胆碱（EPC），应用成膜-水化法制备包载4-HPR的胶束，加十二氟戊烷（PFP），应用细胞超声破碎仪行超声，从而制备出包载4-HPR的微泡。 2.4-HPR微泡联合超声治疗的裸鼠瘢痕疙瘩模型：将传代培养的处于对数生长期的人瘢痕疙瘩成纤维细胞（浓度为5×107/ml）悬浮于细胞基底膜基质胶溶液中，接种到裸鼠右侧腋窝皮下组织，建立裸鼠瘢痕疙瘩模型。动物模型建立后，裸鼠随机分为三组，即生理盐水组、4-HPR组及4-HPR微泡组。生理盐水组仅给予0.1ml生理盐水溶液；4-HPR组给予4-HPR溶液0.1ml（给药剂量为12.5mg/kg，以4-HPR计算）；4-HPR微泡组给予12.5mg/kg4-HPR微泡溶液0.1ml后，局部给予超声照射（频率3MHZ、功率2W/cm2、周期20％、时间1min）。4-HPR微泡是成膜-水化法包载4-HPR制备的微泡。每组裸鼠均在瘤体体积生长至约100-200mm3时开始给药，给药方式为瘤体内局部注射，隔日给药一次，共给药10次。末次给药48h后向裸鼠尾静脉内推注空气处死所有裸鼠，取出裸鼠瘤组织、心、肝、脾、肺及肾组织行苏木素-伊红染色，观察组织病理学改变。采用免疫组织化学方法检测裸鼠瘤组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4及Smad7蛋白的表达变化，与人瘢痕疙瘩组织比较。 结果：免疫组织化学检测结果发现裸鼠生理盐水组瘤组织中的TGF-β1、Smad2、Smad3及Smad4蛋白表达增强，而Smad7蛋白表达降低，与人体瘢痕疙瘩组织中的蛋白表达相一致。而裸鼠4-HPR组和微泡组瘤组织中的TGF-β1、Smad2、Smad3及Smad4蛋白表达均减弱，而Smad7蛋白则表达增强。虽然微泡组Smad7蛋白表达比4-HPR组更强，但两组之间统计无显著性差异。苏木素-伊红染色结果发现裸鼠生理盐水组的瘤组织成纤维细胞叠加多，呈无极性排列，与人瘢痕疙瘩组织的病理改变相一致。4-HPR组成纤维细胞减少、排列无极性、叠加减少。4-HPR微泡组成纤维细胞明显减少、有序排列、无叠加。裸鼠的心、肝、脾、肺及肾组织均无组织病理学改变。 结论： 1.4-HPR通过降低TGF-β/Smads通路中的TGF-β1、Smad2、Smad3及Smad4蛋白表达来抑制瘢痕疙瘩的生长。 2.4-HPR通过增强TGF-β/Smads通路中Smad7蛋白表达来抑制瘢痕疙瘩的生长。 3.裸鼠的心、肝、脾、肺及肾组织均无组织病理学改变，说明4-HPR药物实验剂量安全且无毒性。