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目的1.探索抑癌基因P14ARF基因甲基化与CIN发生发展的关系；2.研究叶酸与5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对宫颈上皮内瘤变细胞P14ARF基因启动子区甲基化的影响,为CIN的药物治疗提供理论依据。方法1.标本来源收集山西医科大学第二医院妇产科201 0年9月至2011年2月间门诊或住院部收治的首次确诊有宫颈病变患者的宫颈上皮组织89例,取宫颈同一点病变组织离体后,分两份,一份甲醛固定做常规病理检查,另一份放入磷酸缓冲盐溶液(PBS)中进行实验室培养。2.检测P14ARF基因甲基化状态采用甲基化特异性PCR(methylation -specific PCR, MSP)技术,检测59例人宫颈上皮内瘤变外植体模型经药物干预前后P14ARF基因甲基化状况。根据干预药物的不同,分为空白对照组(即干预前组)、叶酸干预组、5-Aza-CdR干预组,及叶酸与5-Aza-CdR联合干预组。3.结果判定取10μLPCR产物在2%琼脂糖凝胶上电泳,EB染色,成像仪观察并摄像。只出现甲基化产物,判定为甲基化阳性(可同时非甲基化产物)；只出现非甲基化产物时计为非甲基化；既未获得甲基化产物也未获得非甲基化产物则标志本次实验失败。4.统计学分析采用SPSS17.0软件进行卡方检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果1.宫颈上皮内瘤变病变组织培养成功率分别为CIN I级10.6(5/47),CIN II级37.5%(9/24)CINⅢ级38.9%(7/18)。2.59例标本中P14ARF甲基化率随着病变程度的加重逐渐升高(CINⅠ14.8%, CINⅡ52.6%, CINⅢ70.0%),采用χ2检验对每组之间P14ARF甲基化率进行比较,其中CINⅠ分别与CINⅡ及CINⅢ相比P<0.05差异具有统计学意义,CINⅡ与CINⅢ之间p>0.05差异不具有统计学意义。3.59例细胞标本经药物于预48小时后,空白对照组(即干预前组)、叶酸组、5-Aza-CdR组及两药联合组的甲基化率分别为35.6% (21/59)、22.0% (13/59)、16.9% (10/59)、3.4% (2/59);可见两药联合组P14ARF甲基化率较单药干预组明显降低。将四组甲基化率两两配对,采用χ2检验进行差异性比较,两药联合干预组与其它组织相比差异均有统计学意义(p<0.05),其中对照组与5-Aza-CdR组X2=5.295, p=0.035,差异具有统计学意义；对照组与两药联合干预组相比P<0.01,差异具有统计学意义；叶酸组与联合干预组相比X2=7.642, p=0.004,差异具有统计学意义；5-Aza-CdR组与两药联合组相比,校正后的X2=4.546, p=0.029,差异有统计学意义。结论1.抑癌基因P14ARF的甲基化率随着CIN病变程度的加重而升高,说明其可能与CIN的发生发展有关。2.联合应用叶酸与5-Aza-CdR可能部分逆转P14ARF基因的高甲基化状态,有望成为治疗宫颈上皮内瘤变的有效药物。