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目的:肥胖是一种表现为体内脂肪堆积过多和(或)分布异常、体重增加的慢性代谢性疾病。糖尿病是以血糖升高为特征的代谢性疾病,90%以上为2型糖尿病(T2DM)。肥胖和T2DM的共同特征为胰岛素抵抗,而胰岛素抵抗与系统性慢性低度炎症密切相关。近年来研究显示,肥胖和T2DM个体的脂肪组织中M1型(炎性)巨噬细胞增多。半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)是细胞程序性死亡过程中的关键酶,炎性caspase通过激活炎症小体,促进炎性细胞因子IL-1β和IL-18的成熟和释放。本研究通过检测血浆中单核细胞caspase活性,分析其与体重指数BMI、腰围、血糖、血脂、血中炎性细胞因子浓度之间的相关性,同时体外高糖刺激人THP-1单核细胞,检测单核细胞活性,探讨单核细胞caspase与肥胖和T2DM的关系,为肥胖和T2DM的发病和治疗机制新视角。内容:第一部分:招募健康人和T2DM病人,测量身高、体重、腰围,计算BMI,根据BMI和腰围分为3组:正常组、T2DM组、T2DM合并肥胖组。每名志愿者各抽取2ml EDTA抗凝血和2ml分离胶促凝血,检测空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平。提取抗凝血中的单个核细胞,检测单核细胞caspase活性,分析单核细胞caspase活性与以上各指标的相关性第二部分:收集正常组、T2DM组、T2DM合并肥胖组分离胶促凝血,检测血清中IL-1β、TNF-α、脂多糖(LPS)、游离脂肪酸(NEFA)水平,并分析单核细胞caspase活性与以上各指标的相关性。第三部分:体外培养人THP-1单核细胞株,首先用含33mM葡萄糖的1640培养THP-1,分别培养12小时、24小时、36小时、48小时,检测单核细胞caspase活性;然后分别用含25mM、33mM葡萄糖的1640培养12小时和24小时,检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,以含11mM葡萄糖1640培养的THP-1单核细胞作为对照,进一步验证高血糖对于单核细胞活性的影响。方法:招募健康人和T2DM病人共37人,测量身高、体重、腰围,计算BMI,根据BMI和腰围分为正常组、T2DM组、T2DM合并肥胖组,生化全自动分析仪检测血液中FPG、TG、TC,糖化血红蛋白分析仪检测HbA1c,流式细胞术检测单核细胞caspase活性,ELISA检测血清IL-1β、TNF-α、LPS水平,游离脂肪酸试剂盒检测血清中NEFA水平。在体外用含33mM葡萄糖的1640培养THP-1,分别培养12小时、24小时、36小时、48小时,流式细胞术检测单核细胞caspase活性,然后分别用含25mM、33mM葡萄糖的1640培养THP-1单核细胞12小时和24小时,细胞毒性试剂盒检测细胞上清液中LDH。结果:第一部分结果显示:T2DM合并肥胖组总单核细胞、炎性单核细胞以及经典单核细胞caspase活性均显著高于正常组,总单核细胞caspase活性与BMI、腰围显著正相关,与FPG、HbA1c、TG、TC不相关。第二部分结果显示:T2DM合并肥胖组IL-1β水平显著高于正常组和T2DM组,T2DM组NEFA水平显著高于正常组,但T2DM合并肥胖组NEFA水平与正常组无显著差异。总单核细胞caspase活性、炎性单核细胞caspase活性均与IL-1β显著正相关,与TNF-α、LPS、NEFA不相关。第三部分结果显示:与含11mM葡萄糖的1640培养的THP-1单核细胞相比,高糖的培养条件并未影响单核细胞的caspase活性以及细胞上清液中LDH水平。结论:肥胖和T2DM可能在外周血单核细胞caspase活性升高中发挥协同促进作用。