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目的:
研究在大鼠急性脊髓损伤模型中,伤后早期硬膜下注射Butin,观察其对脊髓组织中粒细胞浸润和后肢运动功能的影响。
方法:
1.选用60只健康的生长三月的雌性SD大鼠(重约180-200克)随机分为三组,A组(假手术组),无菌条件下仅对大鼠T12做椎板切除,将脊髓暴露,不做任何处置,直接将切口缝合,另两组分别用改良Allens打击法将大鼠脊髓损伤;B组(对照治疗组)用一定外力势能破坏暴露的T12脊髓组织,伤后将10μl1%DMSO生理盐水通过硬膜下注射注入损伤区域;C组(Butin治疗组)同样外力势能破坏暴露充分的T12脊髓组织,伤后将10μl Butin溶液通过硬膜下注射注入损伤区。大鼠术后24h后用250ml生理盐水灌注,选取以损伤区为中心,取上下约3cm脊髓组织作为标本,提取蛋白。运用Western blot检测分析和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性检测分析标本。大鼠术后饲养至2周,记录大鼠后肢运动情况的改变,并进行运动功能分析。观察时间点分别为:1d,3d,7d,14d。
2.本实验根据记录的后肢恢复情况变化,采用BBB评分方法,对三组实验大鼠进行评分比较。
3.大鼠术后24h灌注取标本后,用Western blot检测分析的方法,记录每组大鼠脊髓样本的NF-κB p65及Caspase-3表达情况,并用图像分析计算系统计算各组蛋白样本IOD值,然后统计学分析。
4.大鼠术后24h灌注取标本后,运用紫外可见光分光光度计检测蛋白样品OD值,根据公式计算MPO的活性,并进行统计学分析。
5.统计学处理:实验数据以X±S表示,使用SPSS13.0软件包进行单因素分析,以P<0.05表示有统计学意义。
结果:
1.BBB评分三组样本比较,无损伤的A组后肢无明显变化,同A组比较,B,C两组脊髓组织受重力打击伤后,后肢运动功能呈逐渐恢复趋势,总结记录结果,从第7d开始,C组评分较B组明显增加,达到7.61±0.59,差异具有统计学意义(P<0.05)。
2.通过Western blot检测方法检测三组蛋白样品发现,A组中NF-κB p65及Caspase-3均呈低表达,B组中两者表达均明显升高,而经过治疗后的C组中两种蛋白表达较B组的明显减少,最后通过各组IOD值计算得出以上差异具有统计学意义(P<0.05)。
3.检测三种标本蛋白的OD值,分析MPO活性,发现SCI术后24h的B组的MPO活性最高,经过Butin治疗后的C组的MPO活性A组的高,并且C组较B组的有明显下降,计算分析后差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论:
1.Butin对急性脊髓损伤大鼠后肢功能的恢复具有明显作用。
2.Butin可通过抑制抑制NF-KB过度活化,进而减轻免疫炎症反应,减少神经元细胞凋亡,可提高脊髓损伤愈后效果。