合浦珠母贝珍珠层可溶性蛋白的提取分离及其在化妆品中的应用

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合浦珠母贝(Pinctada fucata)亦称为马氏珠母贝,广泛分布于热带与亚热带沿海地区,是我国重要的海水养殖贝类。珠母贝贝壳的结构可分为三层,从外到内分别是角质层、棱柱层、珍珠层。贝壳珍珠层和天然珍珠的显微结构及化学组成基本相同,均由95%以上的文石型碳酸钙和低于5%的有机质组成。本论文以合浦珠母贝珍珠层粉作为研究对象,研究了珍珠层可溶性蛋白的提取与纯化工艺、酪氨酸酶抑制活性及其在化妆品中的应用,具体研究内容如下:  (1)以合浦珠母贝珍珠层粉为原料,采用水溶液浸提法提取珍珠层粉中的可溶性蛋白。以提取率作为衡量指标,对提取液中NaCl的质量浓度、提取时间、溶液pH值、提取温度、料液比进行了单因素和响应面优化实验,确定了珍珠层可溶性蛋白的最佳提取工艺参数为:以0.2%NaCl溶液为提取溶剂,料液比为1∶6,溶液pH值为9,25℃恒温搅拌15h。采用优化后的工艺参数提取珍珠层可溶性蛋白,其得率为74.64%。  (2)以蛋白粗提液为原料,采用聚乙二醇(PEG)/硫酸钠(Na2SO4)双水相体系纯化珍珠层可溶性蛋白。以蛋白回收率作为衡量指标,对双水相体系中的PEG平均分子量、PEG质量分数、Na2SO4的质量分数、离子强度、蛋白粗提液加入量进行了单因素和响应面优化实验,确定了珍珠层可溶性蛋白的最佳纯化工艺参数为:10 g的双水相体系中,PEG2000、Na2SO4、KCl的质量分数分别为30%、6%、1%,蛋白粗提液加入量为2mL。采用优化后的工艺参数纯化珍珠层可溶性蛋白,其得率为92.48%。  (3)研究了珍珠层可溶性蛋白对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的抑制作用、抑制类型及抑制机理。实验结果表明,该蛋白对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力均有良好的抑制效果,且样品浓度与酶活力之间存在剂量依赖关系,对两者的半抑制浓度分别为26.01 mg/mL和14.64 mg/mL。珍珠层可溶性蛋白能显著延长酪氨酸酶单酚酶催化反应的迟滞时间;对二酚酶的抑制类型为可逆抑制,抑制机理是竞争性抑制,米氏常数Km和抑制常数分别为0.21 mg/mL和3.360 mg/mL。  (4)探索了珍珠层可溶性蛋白在化妆品中的应用,利用乳化法制备出一种水包油(O/W)型膏霜类美白护肤品,并对该美白护肤霜的稳定性、理化指标和卫生状况进行了综合评价。实验结果表明,该护肤霜外观稳定均一,pH值(6.4)接近人体皮肤表面酸碱度,重金属含量、菌落总数、霉菌和酵母菌总数均符合标准,证明产品的感官指标、理化指标及卫生指标均达到了《化妆品安全技术规范》(2015年版)和QB/T1857-2004的相关要求。
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