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目的检测SKOV-3细胞中Nanog基因和蛋白的表达,探讨HA/CD44信号通路中,Nanog调节SKOV-3细胞分子机制。
方法运用RT-PCR法检测卵巢癌细胞株SKOV-3中的Nanog基因表达情况;采用westernblot法检测SKOV-3细胞中Nanog基因蛋白的表达情况;分别添加HA及抗CD44抗体后再添加HA,应用westernblot检测办法测SKOV-3细胞中Nanog蛋白含量;设计并合成NanogsiRNA和NanogcDNA,分别以脂质体LipofectTRANSfection转染试剂包裹后转染人卵巢癌细胞株SKOV-3,并设立空转为LipofectTRANSfection转染试剂对照,转染48h后分别添加HA检测Nanog蛋白的表达变化。
结果(1)Nanog基因及其蛋白在SKOV-3细胞中表达阳性(图2.1,图2.3)。
(2)无添加空白对照组、添加HA组、添加anti-CD44抗体及HA组、转染NanogsiRNA组、转染NanogcDNA组,细胞核Nanog蛋白相对含量分别为:0.2846±0.0047、0.5547±0.0104、0.1956±0.0117、0.0962±0.0086、0.6796±0.0053。转染NanogcDNA组细胞核Nano蛋白相对含量明显高于其他4组(P<0.05),转染NanogsiRNA组细胞核Nano蛋白相对含量明显低于其他4组(P<0.05),添加HA组细胞核Nanog蛋白相对含量高于对照组(P<0.05),添加anti-CD44抗体及HA组细胞核Nanog蛋白相对含量低于对照组,(P<0.05),添加anti-CD44抗体及HA组细胞核Nanog蛋白相对含量明显低于添加HA组(P<0.05)。各组间差别有统计学意义(P<0.05)。(图2.4)
结论(1)Nanog基因在卵巢癌SKOV-3细胞表达阳性,并表达Nanog蛋白。
(2)HA与CD44受体结合参与调节细胞核Nanog蛋白的表达。
(3)HA与CD44受体结合使Nanog与CD44之间相互作用,促进细胞核易位及随后的目的基因表达,表明HA/CD44介导的信号转导道路激活Nanog基因在调节卵巢癌细胞生长、侵袭与转移中起到重要的作用。
方法运用RT-PCR法检测卵巢癌细胞株SKOV-3中的Nanog基因表达情况;采用westernblot法检测SKOV-3细胞中Nanog基因蛋白的表达情况;分别添加HA及抗CD44抗体后再添加HA,应用westernblot检测办法测SKOV-3细胞中Nanog蛋白含量;设计并合成NanogsiRNA和NanogcDNA,分别以脂质体LipofectTRANSfection转染试剂包裹后转染人卵巢癌细胞株SKOV-3,并设立空转为LipofectTRANSfection转染试剂对照,转染48h后分别添加HA检测Nanog蛋白的表达变化。
结果(1)Nanog基因及其蛋白在SKOV-3细胞中表达阳性(图2.1,图2.3)。
(2)无添加空白对照组、添加HA组、添加anti-CD44抗体及HA组、转染NanogsiRNA组、转染NanogcDNA组,细胞核Nanog蛋白相对含量分别为:0.2846±0.0047、0.5547±0.0104、0.1956±0.0117、0.0962±0.0086、0.6796±0.0053。转染NanogcDNA组细胞核Nano蛋白相对含量明显高于其他4组(P<0.05),转染NanogsiRNA组细胞核Nano蛋白相对含量明显低于其他4组(P<0.05),添加HA组细胞核Nanog蛋白相对含量高于对照组(P<0.05),添加anti-CD44抗体及HA组细胞核Nanog蛋白相对含量低于对照组,(P<0.05),添加anti-CD44抗体及HA组细胞核Nanog蛋白相对含量明显低于添加HA组(P<0.05)。各组间差别有统计学意义(P<0.05)。(图2.4)
结论(1)Nanog基因在卵巢癌SKOV-3细胞表达阳性,并表达Nanog蛋白。
(2)HA与CD44受体结合参与调节细胞核Nanog蛋白的表达。
(3)HA与CD44受体结合使Nanog与CD44之间相互作用,促进细胞核易位及随后的目的基因表达,表明HA/CD44介导的信号转导道路激活Nanog基因在调节卵巢癌细胞生长、侵袭与转移中起到重要的作用。