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多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase, PPO)对茶树的生理代谢和生产加工都有着极为重要的作用,然而目前缺少对茶树PPO单一同工酶的研究。本课题以绿茶适制性最好的龙井43号茶树品种为材料,通过硫酸铵分级沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析,分离纯化得到三种PPO单一同工酶,并对PPOⅠ、PPOⅢ的酶学特性进行了研究。主要研究结果如下：(1)以龙井43号茶鲜叶为材料,在不同的单因素条件下提取粗酶液,通过测定粗酶活性和非变性凝胶电泳比较同工酶条带等,确定PPO粗酶提取的最佳条件。结果表明,以料液比1：2,加入内含5%PVP (w/v)经预冷的pH7.2柠檬酸-磷酸盐缓冲液(0.15mol/L),冰浴研磨,隔夜浸提12h,于4℃、9000r/min离心35min,取上清液,过滤制得的PPO粗酶液活性最高,出现5条明显的同工酶带。(2)最佳提取条件得到的PPO粗酶,经优化确定以30%-80%的硫酸铵分级沉淀除去部分杂蛋白,沉淀经超滤脱盐浓缩,再经过DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换层析、Sephndex G-150凝胶过滤层析纯化得到三条电泳纯的PPO单一同工酶(PPOⅠ、PPOⅡ、PPOⅢ、PPOⅠ、PPOⅡ、PPOⅢ的大小分别为38kDa、48kDa和80kDa,分别被纯化14.41、1.08和1.30倍,比活力为7177.0U/mg、537.45U/mg和648.22U/mg。(3)酶学特性研究表明,PPOⅠ的最适pH为5.6,PPOIII的最适pH为6.8,二者在pH5.6-7.2的范围内均能保持60%以上的相对酶活。PPOⅠ、PPOⅢ的最适温度分别为30℃和35℃,25℃-40℃的温度范围内,二者活性均较高；温度超过60℃时,二者基本失活。亚硫酸钠、半胱氨酸、抗坏血酸均对PPOⅠ、PPOⅢ有抑制作用,半胱氨酸抑制效果相对较好,低浓度的Cu2+对PPOⅠ、PPOⅢ的活性有促进作用。以邻苯二酚为底物时,PPOⅢ对底物的亲和力要强于PPOⅠ。 PPOⅠ的Km值为91.34mmol/L, PPOⅢ的Km值为51.65mmol/L。