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目的:检测小鼠黑色素瘤细胞株B16促红细胞生成素受体(erythropoietin receptor, EPOR)的表达,探讨促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)对B16细胞体内外增殖作用的影响、对达卡巴嗪(dacarbazine, DTIC)、顺铂(cisplatin, DDP)抗肿瘤活性的调节作用及其与Bcl-2家族蛋白表达的关系。观察EPO体内外对免疫功能调节作用。以期对EPO合理用于临床治疗肿瘤相关性贫血和预后判断提供理论基础。方法:1采用逆转录-聚合酶链反应(revers transcription PCR,RT-PCR)、免疫荧光和激光共聚焦显微镜(laser scanning microscope, LSM)、免疫印迹(western blot)等方法检测B16细胞EPOR mRNA和蛋白的表达。2采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测不同浓度EPO(5、10、100U/ml)及其与达卡巴嗪(1、10、50、100μg/ml)和顺铂(0.5, 1, 10, 100μg/ml),联合应用时对B16细胞生长的影响。3采用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测不同浓度EPO(5、10、100U/ml)作用24小时后对B16细胞周期的影响。4采用western blot法检测不同浓度EPO(5、10、100U/ml)对B16细胞Bcl-2、Bcl-xL、Bax蛋白表达的影响。5建立B16细胞移植瘤模型,从接种细胞第5天起,分别用EPO、DTIC、DDP和EPO联合DTIC、DDP药物处理,盐水处理组作为对照。观察肿瘤细胞在小鼠体内的生长情况。部分小鼠于停药后次日摘除眼球取血,分析血液中红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞压积(Hct)和白细胞(WBC)水平。并引颈处死小鼠,剥离瘤体,分别称量瘤重。部分小鼠用于生存期观察。6将上述正常对照组、盐水处理组和EPO处理组部分小鼠,药物处理两周后处死。观察各组小鼠脾脏指数、脾脏单个核细胞CD4+、CD8+T细胞亚群的分布、血清IL-2和TNF-α细胞因子的水平。7观察不同浓度EPO(1、5、10、100U/ml)对正常小鼠脾细胞增殖和细胞因子分泌的影响。结果:1 B16细胞表达EPOR mRNA和蛋白。2 EPO可明显促进B16细胞的增殖(P<0.05);能有效抑制达卡巴嗪诱导B16细胞的凋亡(P<0.05),但未能显著影响顺铂诱导B16细胞的凋亡作用(P>0.05)。3流式细胞技术分析结果显示,EPO可增加B16细胞S期的百分率,减少G0/G1期细胞比例(P<0.05)。4 Western blot分析结果显示,经不同浓度EPO处理24小时后,B16细胞Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达水平明显增加(P<0.05),Bax蛋白表达水平未见明显变化(P>0.05)。5 EPO处理组小鼠的肿瘤体积和重量与盐水处理组相比没有统计学差异(P>0.05);DTIC处理组和DTIC联合EPO处理组小鼠的肿瘤体积和重量与盐水处理组相比显著缩小(P<0.01),但该两组小鼠间的肿瘤体积和重量没用统计学差别(P>0.05);DDP处理组小鼠的肿瘤体积和重量与盐水处理组相比显著缩小(P<0.05),但DDP联合EPO处理组小鼠的肿瘤体积又明显小于DDP处理组(P<0.05)。应用EPO处理组的小鼠外周血RBC、Hb和Hct水平明显高于未应用EPO组(P<0.05)。EPO联合DDP处理组小鼠外周血的WBC水平与DDP处理组相比升高(P<0.05)。6 EPO可明显提高荷瘤小鼠的脾脏指数(P<0.05);盐水处理组及EPO处理组荷瘤小鼠脾CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+T比值明显低于正常小鼠(P<0.05)。EPO处理组与盐水处理组相比,CD4+T细胞百分率无差别(P>0.05),而CD8+T细胞百分率下降(P<0.05),致使EPO处理组小鼠CD4+/CD8+T比值升高(P<0.05);盐水处理组及EPO处理组荷瘤小鼠血清中TNF-α、IL-2含量明显低于正常小鼠(P<0.05),EPO处理组小鼠血清中IL-2水平与盐水处理组相比增高(P<0.05),但该两组小鼠血清中TNF-α含量无差别(P>0.05);7各浓度EPO对ConA活化的正常脾细胞增殖和细胞培养上清中TNF-α和IL-2含量无明显影响(P>0.05)。结论:1 B16细胞表达EPOR mRNA和蛋白。2 EPO可明显促进B16细胞增殖,这种促增殖作用可能与其影响细胞周期发展有关。EPO还可调节化疗药对B16细胞的抗肿瘤活性,这种作用与化疗药的类型有关。3 EPO对B16细胞的促增殖和调节化疗药抗肿瘤活性的作用,可能与EPO影响Bcl-2家族蛋白表达有关。4 EPO的应用对黑色素瘤细胞在小鼠体内的生长没有明显影响;但EPO能增强黑色素瘤细胞对DTIC、DDP的敏感性,且该调节作用与化疗药的类型有关。5 EPO可通过改善机体贫血状态调节小鼠的免疫功能。