论文部分内容阅读
血红铆钉菇是一种名贵食用菌,目前,血红铆钉菇的研究主要集中于其栽培技术和菌丝体发酵工艺,其多糖的研究还不够深入。随着生活节奏加快,疲劳在生活中尤为常见,因此如何提高运动耐力,及时延缓或消除疲劳成为现在研究热点之一。真菌多糖由于其具有重要的生理活性受到广泛关注,因此,本文对血红铆钉菇多糖进行了提取、纯化,对其结构做了初步分析,并对其缓解体力疲劳功能做了研究,为血红铆钉菇产品的开发提供参考。(1)血红铆钉菇多糖提取及工艺优化采用水提醇沉方法提取血红铆钉菇中多糖,分别考察了液料比、提取温度、提取时间和提取次数对血红铆钉菇多糖得率的影响,并应用响应面试验优化了血红铆钉菇多糖提取的最佳工艺参数,最佳工艺参数为:液料比为20:1,提取温度为90℃,提取时间为2.50h,提取次数为3次,此时多糖得率为7.73%。用Sevage法去除血红铆钉菇多糖中的蛋白,应用此法去除6次后,蛋白去除率可达97.71%。(2)血红铆钉菇多糖纯化分级采用DEAE-纤维素离子交换柱层析和CL-6B琼脂糖凝胶柱层析对血红铆钉菇粗多糖进行分级精制。先经DEAE-纤维素纯化分级后得到4种级分,GRPA-0、GRPA-1、GRPA-2和GRPA-3,苯酚硫酸法和间羟基联苯法分别检测总糖和糖醛酸含量,只有GRPA-0不含糖醛酸。GRPA-1、GRPA-2和GRPA-3经CL-6B琼脂糖柱层析得到GRPA-2-1、GRPA-2-2、GRPA-3-1和GRPA-3-2 4个主要级分,总糖和糖醛酸含量检测,4种级分均含有糖醛酸。(3)血红铆钉菇多糖四种级分的结构分析对GRPA-2-1、GRPA-2-2、GRPA-3-1和GRPA-3-2四种级分进行紫外全波长扫描,在190nm左右有最大吸收峰,符合多糖的特征吸收,在260nm和280nm处无明显的吸收峰,说明其中不含游离核酸和蛋白成分;进行傅里叶红外光谱扫描,光谱图显示具有多糖的吸收峰,并且具有吡喃环C-H键的变角振动,表明四种级分多糖为吡喃糖;高效液相色谱对各级分多糖进行单糖组成分析,GRPA-2-1和GRPA-2-2由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖组成,其比例分别为4.4:2.3:1.8:53.3:28.1:10.1和5.3:1.9:3.1:51.1:30.2:2.3;GRPA-3-1和GRPA-3-2由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,其比例分别为4.3:8.2:1.2:72.1:8.6:5.6和3.4:3.5:2.1:78.2:9.9:2.9;高效液相色谱测得四种级分的多糖分子量分别为:440550Da,687610Da,377650Da和1118550Da。(4)血红铆钉菇多糖缓解体力疲劳功能的研究通过动物实验研究血红铆钉菇多糖缓解体力疲劳功能,对小鼠进行低(100mg/kg/d)、中(250mg/kg/d)、高(625mg/kg/d)三个血红铆钉菇多糖剂量灌胃,测定小鼠力竭游泳时间、血乳酸、血尿素氮和肝糖原含量。结果发现,各剂量组均可延长小鼠游泳时间,其中中剂量组效果显著。生化指标测定结果中,与对照组相比,血红铆钉菇多糖中剂量组可显著降低体内血尿素氮和血乳酸含量,增加体内肝糖原储备,表明血红铆钉菇多糖具有一定缓解体力疲劳的功能。