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白细胞介素-24(IL-24),又名黑色素瘤分化相关基因-7(mda-7), mda-7/IL-24是一种广谱性抗肿瘤药物,可以选择性摧毁肿瘤细胞但是对正常细胞或者组织没有伤害。本论文选取E.coli BL21(DE3)为宿主菌,pET-28a(+)为表达载体,成功实现了mda-7/IL-24的异源构建与表达,蛋白表达量约为29.6%,重组蛋白为包涵体。包涵体的变复性。探讨了不同浓度的尿素、盐酸胍及精氨酸的添加对mda-7/IL-24包涵体的溶解效果,优化后的变性缓冲液为20mM Tris,10mM EDTA,8M urea, pH9.5。经6次不同缓冲液逐步透析复性：尿素浓度递减(6M-3M-1.5M-0.75M-0M-0M),pH梯度逐渐减少(9.5-9.0-8.5-8.0-7.5-7.4),静水压采用0.5-1.0kPa,添加还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽10：1,甘油浓度递减(20%-15%-10%-5%-0%-0%),最终得到溶于PBS中的IL-24蛋白。本论文还优化了发酵条件以改善包涵体结构。优化所得的结果为：培养基配方为MgSO41.88g/L, CaCl21.84g/L, MnSO4·H2O0.50g/L,酵母粉5g/L,蛋白胨10g/L和NaCl10g/L;37℃培养,当菌浓OD600达到0.6-0.8时用0.1mM IPTG诱导,诱导温度为30℃。通过SEM发现优化后的包涵体结构确实得到了改善,包涵体变得疏松,直径变小,这可能是后续变性率提高的直接原因。优化后包涵体的变性率提高了50.52%,总的复性率提高了83.78%。mda-7/IL-24蛋白的纯化。初期比较了先复性后纯化和先纯化后复性两种纯化工艺。先复性后纯化蛋白总收率约为12.76%,所得mda-7/IL-24蛋白纯度约90%；而先纯化后复性在处理过程中蛋白损失量大,总收率几乎为0。后期建立了一种通过洗涤包涵体来纯化mda-7/IL-24蛋白的方法,省去了镍亲和层析纯化步骤。洗涤条件为：分别用buffer Ⅰ (20mM Tris-HCl,10mM EDTA,100mMNaCl,1.0%Triton X-100,2MUrea, pH8.5), buffer Ⅱ (20mM Tris-HCl,10mM EDTA,2.0%Triton X-100,4MUrea, pH8.5), buffer Ⅲ (20mM Tris-HCl,10mM EDTA,1.0%Triton X-100,4MUrea, pH9.5)和去离子水洗涤,每次均采用搅拌洗涤2小时,10,000rpm离心30min,取沉淀。所得mda-7/IL-24蛋白纯度为96%。mda-7/IL-24蛋白的体外活性检测。采用MTT比色法和流式细胞仪分析检测了mda-7/IL-24蛋白的体外活性,结果为经洗涤纯化、复性后的mda-7/IL-24蛋白对A375和MCF-7有选择性凋亡作用。