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目的：探讨p12-LOX,NF-κB和Ezrin基因在上皮细胞源性肿瘤演进过程中的作用及机制,为上皮细胞源性肿瘤的诊断、预后评估及临床治疗提供可能的新分子靶点。方法：培养处于不同阶段的3种小鼠表皮细胞,即正常的JB6P-、已启动化(initiated)的JB6P+、黑色素瘤B16细胞和7种人胃癌细胞,即高分化的MKN-1、SNU-216,中分化的MKN-28、MKN-74、NCI-N87(N87)和低分化的MKN-45、AGS细胞。提取3种小鼠表皮细胞(JB6P-、JB6P+和B16细胞)的总RNA,进行miRNA基因芯片检测,明确肿瘤演进过程中差异miRNA表达,并通过Targetscan网站检索miR17、miR-19和miR-31的作用靶点。用p12-LOX的选择性抑制剂黄芩素(Baicalein,BAI)、NF-κB的选择性抑制剂BAY11-7082(BAY)以及NF-κB和Ezrin的特异性siRNA (NF-κB siRNA和Ezrin siRNA)处理细胞,用RT-PCR法检测p12-LOX和Ezrin基因mRNA的表达,并进行细胞增殖、划痕、软琼脂克隆形成、单个细胞克隆形成和细胞凋亡检测等功能实验,并对Ezrin蛋白进行免疫荧光染色,同时利用蛋白印迹法检测7种胃癌细胞的Ezrin蛋白表达水平。此外,还对335例胃病变组织标本(包括癌旁正常胃粘膜26例、不典型增生32例和胃癌277例)进行Ezrin蛋白的免疫组化染色,结合临床资料进行相关性分析。结果：1、小鼠表皮细胞miRNA基因芯片检测结果：共检测722种miRNA。与正常JB6P-细胞相比,在JB6P+和(或)B16中有46种miRNA表达上调(变化最明显的有miR-138、miR-130b、miR-378、miR-31、miR-19b和miR-17等),35种miRNA表达下调(变化最明显的有miR-214、miR-486、miR-143和miR-145等)。Targescan网站检索发现：其中miR-17、miR-19和miR-31等与MAPK、PI3K/Akt、NF-κB等信号转导通路有相关性。2、RT-PCR结果：(1)p12-LOX mRNA的表达：①小鼠表皮正常JB6P-细胞的表达最低,其次为已启动化的JB6P+细胞,黑色素瘤B16细胞的表达最高,提不p12-LOX与黑色素瘤的发生发展有密切相关性；②胃癌细胞中的p12-LOXmRNA表达水平有明显差异,在高分化的MKN-1、SNU-216细胞中表达最低,其次为中分化的MKN-74、MKN-28和N87细胞,在低分化的MKN45细胞中表达最高,提示p12-LOX高表达可促进胃癌的发展。(2)Ezrin mRNA的表达：①与JB6P+细胞相比较,B16细胞的Ezrin mRNA表达明显增高,提示Ezrin可促进小鼠黑色素瘤的发生；②胃癌细胞中的Ezrin mRNA表达水平也有明显差异,在低侵袭性的MKN-1细胞中表达较低,而在高侵袭性的MKN-74、MKN-28、MKN-45和高迁移性SNU-216等细胞中表达较高,提示Ezrin高表达可促进人胃癌的发展及侵袭。(3)BAI和BAY处理对胃癌细胞Ezrin mRNA表达的影响：BAI和BAY处理可明显抑制MKN-74和N87细胞Ezrin mRNA的表达,反向提示p12-LOX和NF-κB可参与调控Ezrin的表达。3、MTT细胞增殖实验结果：经BAI和BAY处理,B16和人胃癌细胞均呈浓度和时间依赖性地抑制细胞增殖,与对照组比较均有显著差异(P<0.01),反向提示p12-LOX和NF-κB可促进上皮细胞源性肿瘤细胞的增殖。4、细胞迁移(划痕)实验结果：BAI呈浓度依赖性的地抑制B16细胞的迁移,BAI和BAY以及NF-κB siRNA和Ezrin siRNA均明显抑制B16和MKN-1、SNU-216、AGS等细胞的迁移,反向提示p12-LOX、NF-κB和Ezrin基因可促进肿瘤细胞迁移。5、Ezrin蛋白的免疫荧光染色结果：(1)Ezrin蛋白表达在静止的细胞中主要分布于细胞膜和细胞浆,而在迁移的细胞中主要分布于细胞伸出伪足的部位；(2)BAI和Ezrin siRNA处理可明显下调B16和MKN-1细胞的Ezrin蛋白表达水平,反向提示p12-LOX可通过上调Ezrin蛋白的表达促进细胞迁移；(3)BAY及NF-κB siRNA处理也明显抑制了细胞迁移,但Ezrin蛋白的荧光表达没有受抑制,提示NF-κB信号转导通路可以促进肿瘤细胞迁移,但不是通过调控Ezrin蛋白发生作用的。6、软琼脂克隆形成实验结果：BAI处理呈浓度依赖性地明显抑制B16细胞的软琼脂克隆形成,提示p12-LOX抑制剂可杀伤小鼠B16细胞。7、单个细胞克隆形成实验结果：BAI呈浓度依赖性的明显抑制小鼠B16细胞的单个细胞克隆形成,提示p12-LOX可促进单个细胞增殖,其抑制剂可杀伤小鼠黑色素瘤细胞。8、细胞凋亡检测结果：BAI和BAY以及Ezrin siRNA处理明显促进细胞凋亡,提示p12-LOX、 NF-κB和Ezrin可通过抑制细胞凋亡促进肿瘤的演进。9、胃组织Ezrin蛋白免疫组化染色结果：(1)Ezrin蛋白染色强阳性率在正常胃粘膜组为0%,不典型增生组和胃癌组中分别为37.5%和60.6%,与正常组比较均有显著性差异(分别P<0.05和P<0.01)；(2)Ezrin蛋白染色强阳性率与胃癌分型、淋巴转移、临床分级和无病生存期呈正相关,与对照组比较均有显著性差异(分别P<0.01,P<0.01,P<0.05和P<0.01),而与年龄、性别和组织学类型等均无关。提示,Ezrin蛋白可作为胃癌临床诊断和预后评估的有效分子指标,Ezrin有望成为胃癌治疗的新分子靶点。结论：1、在上皮源性肿瘤的演进过程中,不同发展阶段存在明显的差异miRNA表达,其中上调表达变化明显的有miR-138、miR-130b、miR-378、miR-31、miR-19b和miR-17等,而下调表达明显的有miR-214、miR-486、miR-143和miR-145等。2、p12-LOX可通过上调肿瘤细胞Ezrin mRNA和蛋白表达促进小鼠黑色素瘤和人胃癌细胞的增殖和侵袭。3、NF-κB抑制剂可明显抑制细胞迁移、促进细胞凋亡,但没有影响Ezrin蛋白的表达,提示NF-κB促进肿瘤演进的作用不是通过调控Ezrin蛋白实现的。4、Ezrin基因可促进体外小鼠黑色素瘤和人胃癌细胞的迁移,抑制细胞凋亡,具有促进肿瘤发展和侵袭的作用；Ezrin蛋白过表达与胃癌Lauren分型、淋巴转移、临床分期和无病生存期有明显的正相关,提示Ezrin蛋白可作为胃癌早期诊断和预后评估的有效分子指标之一。