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【摘要】目的：探讨肺结核患者痰标本中结核杆菌检验的方法，提高临床诊断准确率。方法：对2014年1月-2014年6月我院结核门诊接诊的185例初诊肺结核病患者采用胶体金法、涂片检查法和PCR检查法进行痰液结核菌检查。结果：胶体金法、涂片检查法和PCR检查法对于结核杆菌的诊断阳性率分别为34.9%、22.2%和48.6%，其中PCR检查法阳性率最高。阳性率两两比较（P<0.05），具有统计学差异。结论：PCR检查法应用于结核杆菌检查检验，准确率较高，有利于患者疾病的及时治疗。
【关键词】结核杆菌；检验；PCR检查法
结核杆菌是目前传染病中威胁人类健康的二号杀手，具世界卫生组织统计显示，每年大概有900万新发结核病病例，每年死亡病例高达300万。我国结核病疫情比较严重，是全球22个结核病高负担国家之一，年发病人数约130万，占全球发病人数的14%。近年来，随着抗生素的滥用，结核杆菌耐药性的日益加重，人口流动性增加和交叉感染等，导致结核病发病率呈上升趋势。目前，结核病的诊断方法较多，包括：x线、涂片法、病原菌培养法和聚合酶链反应（PCR）等，而这些方法优缺点各异。我们对2014年1月-2014年6月我院结核门诊收治的肺结核患者痰结核菌检测方法进行探讨，现报道如下。
1.资料与方法
1.1一般资料：对2014年1月-2014年6月我院结核门诊收治的185例结核患病者的临床资料进行分析，其中男127例，女58例，年龄18岁68岁。患者临床表現为盗汗、乏力、咳嗽和低热等。所有患者均得以确诊，诊断标准参照《肺结核诊断和治疗指南》。患者感染部位主要为肺、胸膜和淋巴结等。
1.2检测方法：
所有患者均在清晨取深呼吸后咳出的痰液。
1.2.1胶体金法，采用结核杆菌检测试剂盒进行检测，操作步骤严格按照说明书进行。主要步骤为，取约0.5 ml的痰液加入缓冲液后震荡40s，放入37℃恒温水浴锅里孵育1h，加入缓冲液分离蛋白，插入试剂盒中的试纸，进行检测。
1.2.2涂片检查法，取痰标本直接涂片，抗酸染色，通过显微镜检检测涂片上的结核菌。如果100个视野中，发现3-9条，即可确诊为阳性。
1.2.3PCR检查法，取1ml痰液于EP管中，13000 rpm离心10rain，取上清，加生理盐水洗涤1次，13000 rpm离心10min，取上清。于沉淀中加入30ul TB提取液，震荡混匀，依次进行100℃，30min；37℃10min的水浴，13000 rpm离心10min，取上清，PCR反应条件为95℃1min、55℃30s、72℃1 min，循环40次。
1.3统计处理，采用统计学软件SPSS19.0讲行数据处理和分析。计数资料采用均数±标准差（x±s）表示，计量资料比较采用t检验，P<0.05表示具有统计学差异。
2.结果
检测结果对比分析：胶体金法、涂片检查法和PCR检查法对于结核杆菌的诊断阳性率分别为34.1%、22.2%和43.8%，其中PCR检测法阳性率最高，涂片检查法准确率最低。准确率两两比较（P<0.05），具有统计学差异。见表1。
3.討论
结核杆菌是一种抗酸阳性棒状杆菌，属于结核分枝杆菌复合群，是一类慢生的分枝杆菌群体。肺结核时一种呼吸系统疾病，目前，其已成为传染病中威胁人类健康的二号杀手，当病情不及时治疗时，疾病可向肠道、肾脏和肝脏转移等。中国结核疫情严重，具有感染人数多、发病人数多、新发患者多、死亡人数多、农村患者多和耐药者多等特点。卡介苗是预防结核病的常用药物，其对预防儿童脑膜炎结核、栗粒性结核等严重的结核病有预防作用，但对成人肺结核保护效率据文献报道18%到80%不等，对潜伏感染结核几乎无保护作用。尽管卡介苗得到广泛应用，但面对全球结核病疫情的蔓延却无能为力。因此，临床及时的诊断和治疗对于生命健康至关重要。
结核病诊断应根据患者感染部位的不同而提取不同的标本，一般包括：痰液、尿、胸水、脑脊液、粪、心包液和组织匀浆等。标本的收集、保存及检验的及时性，都是影响诊断结果的重要因素。大量临床研究表明，对于肺结核患者而言，清晨所获取的痰液污染率较低，能够有效说明患者疾病状况。因此，我们选取清晨深呼吸后咳出的痰液作为检测标本。
目前，结核病诊断方法较多，包括x线、涂片法、病原菌培养法和聚合酶链反应（PCR）等。胶体金法是通过定性检测结核菌的分泌性蛋白质而对疾病进行诊断。其原理为，将抗结核菌的分泌性蛋白纯化后包被在胶体金上，当样品中含有结核菌分泌性蛋白时，先和包被的胶体金标记物结合，产生反应，通过与试纸上的质控线进行对比，即可判断。涂片检查法是最普遍的方法，通过在痰液中检测结核杆菌对疾病进行判定，具有操作简便、费用低廉和易掌握等特点而得到临床的广泛应用，是检验结核病的“金标准”。但是，大量临床报道显示，其灵敏度较差，敏感性低，准确率低，影响因素多，易受到检验人员人为差异、患者病情和痰液状况的影响。PCR检查法是一种以核酸生物化学为基础的分子生物学诊断技术，具有灵敏度高、特异性好和快速高效等特点，而得到了临床的广泛运用。其通过加入一条与靶基因序列互补的核苷酸探针，当标本出现扩增时，通过检测荧光的变化，即可对诊断结果做出判断。但相对于基层医院，PCR检查法投入仪器成本较高。
为探讨结核患者痰结核杆菌检验的方法，提高临床诊断准确率。我们对2014年10月-2016年10月我院结核门诊收治的185例结核杆菌患者采用胶体金法、涂片检查法和PCR检查法对患者痰液进行检查。结果显示，胶体金法、涂片检查法和PCR检测法对于结核杆菌的检测阳性率分别为34.1%、22.2%和43.8%，其中PCR检查法阳性率最高。准确率两两比较（P<0.05），具有统计学差异。
综上所述，PCR检查法应用于结核杆菌检查，阳性率较高，可为疾病诊断提供可靠的依据，有利于肺结核患者疾病的及时诊断和治疗，对于改善肺结核患者的预后具有重要的作用。
【关键词】结核杆菌；检验；PCR检查法
结核杆菌是目前传染病中威胁人类健康的二号杀手，具世界卫生组织统计显示，每年大概有900万新发结核病病例，每年死亡病例高达300万。我国结核病疫情比较严重，是全球22个结核病高负担国家之一，年发病人数约130万，占全球发病人数的14%。近年来，随着抗生素的滥用，结核杆菌耐药性的日益加重，人口流动性增加和交叉感染等，导致结核病发病率呈上升趋势。目前，结核病的诊断方法较多，包括：x线、涂片法、病原菌培养法和聚合酶链反应（PCR）等，而这些方法优缺点各异。我们对2014年1月-2014年6月我院结核门诊收治的肺结核患者痰结核菌检测方法进行探讨，现报道如下。
1.资料与方法
1.1一般资料：对2014年1月-2014年6月我院结核门诊收治的185例结核患病者的临床资料进行分析，其中男127例，女58例，年龄18岁68岁。患者临床表現为盗汗、乏力、咳嗽和低热等。所有患者均得以确诊，诊断标准参照《肺结核诊断和治疗指南》。患者感染部位主要为肺、胸膜和淋巴结等。
1.2检测方法：
所有患者均在清晨取深呼吸后咳出的痰液。
1.2.1胶体金法，采用结核杆菌检测试剂盒进行检测，操作步骤严格按照说明书进行。主要步骤为，取约0.5 ml的痰液加入缓冲液后震荡40s，放入37℃恒温水浴锅里孵育1h，加入缓冲液分离蛋白，插入试剂盒中的试纸，进行检测。
1.2.2涂片检查法，取痰标本直接涂片，抗酸染色，通过显微镜检检测涂片上的结核菌。如果100个视野中，发现3-9条，即可确诊为阳性。
1.2.3PCR检查法，取1ml痰液于EP管中，13000 rpm离心10rain，取上清，加生理盐水洗涤1次，13000 rpm离心10min，取上清。于沉淀中加入30ul TB提取液，震荡混匀，依次进行100℃，30min；37℃10min的水浴，13000 rpm离心10min，取上清，PCR反应条件为95℃1min、55℃30s、72℃1 min，循环40次。
1.3统计处理，采用统计学软件SPSS19.0讲行数据处理和分析。计数资料采用均数±标准差（x±s）表示，计量资料比较采用t检验，P<0.05表示具有统计学差异。
2.结果
检测结果对比分析：胶体金法、涂片检查法和PCR检查法对于结核杆菌的诊断阳性率分别为34.1%、22.2%和43.8%，其中PCR检测法阳性率最高，涂片检查法准确率最低。准确率两两比较（P<0.05），具有统计学差异。见表1。
3.討论
结核杆菌是一种抗酸阳性棒状杆菌，属于结核分枝杆菌复合群，是一类慢生的分枝杆菌群体。肺结核时一种呼吸系统疾病，目前，其已成为传染病中威胁人类健康的二号杀手，当病情不及时治疗时，疾病可向肠道、肾脏和肝脏转移等。中国结核疫情严重，具有感染人数多、发病人数多、新发患者多、死亡人数多、农村患者多和耐药者多等特点。卡介苗是预防结核病的常用药物，其对预防儿童脑膜炎结核、栗粒性结核等严重的结核病有预防作用，但对成人肺结核保护效率据文献报道18%到80%不等，对潜伏感染结核几乎无保护作用。尽管卡介苗得到广泛应用，但面对全球结核病疫情的蔓延却无能为力。因此，临床及时的诊断和治疗对于生命健康至关重要。
结核病诊断应根据患者感染部位的不同而提取不同的标本，一般包括：痰液、尿、胸水、脑脊液、粪、心包液和组织匀浆等。标本的收集、保存及检验的及时性，都是影响诊断结果的重要因素。大量临床研究表明，对于肺结核患者而言，清晨所获取的痰液污染率较低，能够有效说明患者疾病状况。因此，我们选取清晨深呼吸后咳出的痰液作为检测标本。
目前，结核病诊断方法较多，包括x线、涂片法、病原菌培养法和聚合酶链反应（PCR）等。胶体金法是通过定性检测结核菌的分泌性蛋白质而对疾病进行诊断。其原理为，将抗结核菌的分泌性蛋白纯化后包被在胶体金上，当样品中含有结核菌分泌性蛋白时，先和包被的胶体金标记物结合，产生反应，通过与试纸上的质控线进行对比，即可判断。涂片检查法是最普遍的方法，通过在痰液中检测结核杆菌对疾病进行判定，具有操作简便、费用低廉和易掌握等特点而得到临床的广泛应用，是检验结核病的“金标准”。但是，大量临床报道显示，其灵敏度较差，敏感性低，准确率低，影响因素多，易受到检验人员人为差异、患者病情和痰液状况的影响。PCR检查法是一种以核酸生物化学为基础的分子生物学诊断技术，具有灵敏度高、特异性好和快速高效等特点，而得到了临床的广泛运用。其通过加入一条与靶基因序列互补的核苷酸探针，当标本出现扩增时，通过检测荧光的变化，即可对诊断结果做出判断。但相对于基层医院，PCR检查法投入仪器成本较高。
为探讨结核患者痰结核杆菌检验的方法，提高临床诊断准确率。我们对2014年10月-2016年10月我院结核门诊收治的185例结核杆菌患者采用胶体金法、涂片检查法和PCR检查法对患者痰液进行检查。结果显示，胶体金法、涂片检查法和PCR检测法对于结核杆菌的检测阳性率分别为34.1%、22.2%和43.8%，其中PCR检查法阳性率最高。准确率两两比较（P<0.05），具有统计学差异。
综上所述，PCR检查法应用于结核杆菌检查，阳性率较高，可为疾病诊断提供可靠的依据，有利于肺结核患者疾病的及时诊断和治疗，对于改善肺结核患者的预后具有重要的作用。