观察小干扰RNA(siRNA)沉默活体内芳香烃受体核转运子(ARNT)基因对结肠癌HCT8细胞生长及体内成瘤的影响。
方法ARNT-短发卡RNA(shRNA)慢病毒转染结肠癌HCT8细胞,建立裸鼠皮下移植瘤模型,聚合酶链反应(PCR)法测定HCT8细胞中ARNT mRNA表达量,Western blot法测定HCT8细胞中ARNT蛋白水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定HCT8细胞增殖,流式细胞仪测定HCT8细胞凋亡,建模后1个月称取移植瘤重量、测量移植瘤体积。
结果siRNA-ARNT组ARNT mRNA相对表达量(0.489±0.057)显著低于siRNA-NC组(0.921±0.102)和空白对照组(1.000±0.000)(P=0.000)。siRNA-ARNT组ARNT蛋白表达量(0.478±0.025)显著低于siRNA-NC组(0.818±0.017)和空白对照组(0.827±0.013)(P=0.000)。siRNA-ARNT组细胞24、48、72 h吸光度(A)值均高于siRNA-NC组(0.512±0.107、1.012±0.123、1.121±0.128)和空白对照组(0.503±0.956、0.989±0.121、1.116±0.131)(P=0.000、0.000、0.000)。siRNA-ARNT组细胞凋亡率(55.13±2.78)%高于空白对照组[(4.75±0.68)%,P=0.000],低于siRNA-NC组[(68.32±3.12)%,P=0.000],siRNA-NC组细胞凋亡率高于空白对照组(P=0.000)。siRNA-ARNT组大鼠移植瘤重量[(0.551±0.171) g]和体积[(0.557±0.153) cm3]均高于siRNA-NC组[(0.351±0.082) g、(0.414±0.071) cm3]和空白对照组[(0.325±0.111) g、(0.396±0.063) cm3,P=0.000、0.000]。
结论沉默ARNT基因促进结肠癌HCT8细胞增殖、抑制HCT8细胞凋亡、促进体内移植瘤生长,ARNT基因可能为结肠癌的抑癌基因。