论文部分内容阅读
摘 要 以山蒌单芽茎段为外植体，对其进行组织培养和快速繁殖研究。结果表明：山蒌嫩茎最佳消毒方法为70%酒精消毒30 s，再用0.1%升汞溶液消毒9 min；适合腋芽萌发的启动培养基为MS+0.5 mg/L NAA+3 mg/L 6-BA；继代增殖培养最适宜的培养基为MS+0.1 mg/L NAA+3 mg/L 6-BA；试管苗在1/2MS+3 mg/L NAA+0.1-0.5 mg/L 6-BA生根较好；山蒌试管苗移栽成活率可以达到95%以上。
关键词 山蒌；组织培养；快速繁殖；表面消毒
中图分类号 TS971 文献标识码 A
Abstract Tissue culture and rapid propagation of Piper sarmentosum were conducted with single-node stems as the explants. The results showed that the best surface sterilization was achieved by immersing the explants in the solution of 70% alcohol for 30 seconds then in 0.1% HgCl2 solution for 9 minutes. The medium（MS+0.5 mg/L NAA+3 mg/L 6-BA）was suitable for starting culture of P. sarmentosum. Successful shoot proliferation was obtained on MS supplemented with 0.1 mg/L NAA and 3 mg/L 6-BA. The optimal rooting medium was 1/2MS+3 mg/L NAA+0.1-0.5 mg/L 6-BA.
Key words Piper Sarmentosum； Tissue culture； Rapid propagation； Surface sterilization
doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2014.11.026
山蒌（P. sarmentosum Roxb.）别名有山捞、假蒟、假蒌等，为胡椒科胡椒属植物。在中国海南、广东、广西、云南、福建等南部省区均有分布。山蒌叶面光亮有革质，有一种特异的香味。在海南黎族地区，人们常常用它的叶子来做菜，极具地方风味特色，著名的菜品有“黎家绿叶宝”、“山蒌叶肉碎煎蛋角”、“山蒌叶煎蛋”、“假蒌煎肉夹”、“鱼茶酿苦瓜”等，另外，山蒌叶还可用来爆炒、红烧、干煸、煲煮各色肉品，使菜肴口味醇厚浓香，深受食客欢迎[1-4]。据测定，山蒌叶的维生素、蛋白质、氨基酸和矿质元素营养含量丰富，尤其是山娄叶中钙、铁、锌、锰和锶的含量很高，属于超钙富钾、富锌超铁蔬菜，除具有独特的风味外，还具有良好的保健功能[5]。此外，山蒌具有一定的药用价值，可以全株、根、叶或果实入药。药性辛，温。温中散寒，祛风利湿，消肿止痛。用于胃肠寒痛、风寒咳嗽、水肿、疟疾、牙痛、脚气、痔疮、风湿性关节炎、疝气痛、风湿骨痛、跌打损伤[2]。因此，不论是作为热带特色的香菜，还是作为药用植物，其开发前景都十分广阔。
山蒌繁殖可以用扦插、压条、种子进行繁殖[6]，但常规繁殖方法使用的繁殖材料多，繁殖速度慢，不利于大规模推广种植。而采用组织培养方法进行繁殖，使用起始繁殖材料少，繁殖速度快，而且可以在一定的空间内实现工厂化生产，能在短期内满足大规模推广种植需要[7-8]。目前，对山蒌的组织培养研究尚未见有关报道。因此，本文利用山蒌单芽茎段通过丛生芽途径进行快繁，旨为山蒌的扩大种植和开发利用奠定技术基础。
1 材料与方法
1.1 材料
材料取自海南大学（儋州校区）农学院苗圃基地以及海南大学（儋州校区）园艺园林学院实验基地。2012年7月取野外生长的山蒌进行室内盆栽，待嫩茎长出后取材；另于2013年3～7月连续晴天数天时，上午取材，选取生长旺盛、无病虫害的嫩茎。
1.2 方法
1.2.1 外植体的表面消毒与接种 将采集的山蒌嫩茎剪成长为3 cm左右的单芽茎段，清水浸泡10～20 min，然后转移到洗衣粉水中浸泡15 min，再用流水冲洗30 min后，放入含有多菌灵的溶液中浸泡30 min，再用流水冲洗1 h，用吸水纸虑干备消毒处理。消毒时先用70%酒精浸泡单芽茎段30 s，然后在转移到0.1%升汞溶液（滴有2～3滴吐温）中处理3～12 min。将消毒处理后的外植体用无菌水冲洗4～5次，用灭菌滤纸滤干后放在超净工作台上备用。接种时，在超净工作台上将单芽茎段修剪成1 cm左右，插入灭菌培养基。每个处理接种20瓶，每瓶接种1个外植体，重复3次，于接种15 d后统计污染率、褐化率以及存活率，选择最佳消毒方式。污染率/%=污染的外植体个数/接种外植体总数×100；褐化率/%=未污染的褐变外植体个数/接种外植体总数×100；存活率/%=存活的外植体个数/接种外植体总数×100。
1.2.2 初代培养 初代培养使用的启动培养基为MS+0～0.5 mg/L NAA（1-naphthaleneacetic acid）+0～4 mg/L 6-BA（6-benzylaminopurine）。每个处理组合接种20瓶，每瓶接种1个外植体，3次重复，30 d后统计萌芽率。萌芽率/%=产生芽的外植体数/总的接种外植体数×100。
1.2.3 继代培养 将初代培养生长出来的腋芽接种于附加0～0.2 mg/L NAA、0～4 mg/L 6-BA的MS培养基上，每个处理接种20瓶，每瓶接种1个外植体，3次重复，20 d后统计增殖系数。增殖系数=继代增殖培养1个周期后产生的芽数/增殖培养前转接的芽数。
关键词 山蒌；组织培养；快速繁殖；表面消毒
中图分类号 TS971 文献标识码 A
Abstract Tissue culture and rapid propagation of Piper sarmentosum were conducted with single-node stems as the explants. The results showed that the best surface sterilization was achieved by immersing the explants in the solution of 70% alcohol for 30 seconds then in 0.1% HgCl2 solution for 9 minutes. The medium（MS+0.5 mg/L NAA+3 mg/L 6-BA）was suitable for starting culture of P. sarmentosum. Successful shoot proliferation was obtained on MS supplemented with 0.1 mg/L NAA and 3 mg/L 6-BA. The optimal rooting medium was 1/2MS+3 mg/L NAA+0.1-0.5 mg/L 6-BA.
Key words Piper Sarmentosum； Tissue culture； Rapid propagation； Surface sterilization
doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2014.11.026
山蒌（P. sarmentosum Roxb.）别名有山捞、假蒟、假蒌等，为胡椒科胡椒属植物。在中国海南、广东、广西、云南、福建等南部省区均有分布。山蒌叶面光亮有革质，有一种特异的香味。在海南黎族地区，人们常常用它的叶子来做菜，极具地方风味特色，著名的菜品有“黎家绿叶宝”、“山蒌叶肉碎煎蛋角”、“山蒌叶煎蛋”、“假蒌煎肉夹”、“鱼茶酿苦瓜”等，另外，山蒌叶还可用来爆炒、红烧、干煸、煲煮各色肉品，使菜肴口味醇厚浓香，深受食客欢迎[1-4]。据测定，山蒌叶的维生素、蛋白质、氨基酸和矿质元素营养含量丰富，尤其是山娄叶中钙、铁、锌、锰和锶的含量很高，属于超钙富钾、富锌超铁蔬菜，除具有独特的风味外，还具有良好的保健功能[5]。此外，山蒌具有一定的药用价值，可以全株、根、叶或果实入药。药性辛，温。温中散寒，祛风利湿，消肿止痛。用于胃肠寒痛、风寒咳嗽、水肿、疟疾、牙痛、脚气、痔疮、风湿性关节炎、疝气痛、风湿骨痛、跌打损伤[2]。因此，不论是作为热带特色的香菜，还是作为药用植物，其开发前景都十分广阔。
山蒌繁殖可以用扦插、压条、种子进行繁殖[6]，但常规繁殖方法使用的繁殖材料多，繁殖速度慢，不利于大规模推广种植。而采用组织培养方法进行繁殖，使用起始繁殖材料少，繁殖速度快，而且可以在一定的空间内实现工厂化生产，能在短期内满足大规模推广种植需要[7-8]。目前，对山蒌的组织培养研究尚未见有关报道。因此，本文利用山蒌单芽茎段通过丛生芽途径进行快繁，旨为山蒌的扩大种植和开发利用奠定技术基础。
1 材料与方法
1.1 材料
材料取自海南大学（儋州校区）农学院苗圃基地以及海南大学（儋州校区）园艺园林学院实验基地。2012年7月取野外生长的山蒌进行室内盆栽，待嫩茎长出后取材；另于2013年3～7月连续晴天数天时，上午取材，选取生长旺盛、无病虫害的嫩茎。
1.2 方法
1.2.1 外植体的表面消毒与接种 将采集的山蒌嫩茎剪成长为3 cm左右的单芽茎段，清水浸泡10～20 min，然后转移到洗衣粉水中浸泡15 min，再用流水冲洗30 min后，放入含有多菌灵的溶液中浸泡30 min，再用流水冲洗1 h，用吸水纸虑干备消毒处理。消毒时先用70%酒精浸泡单芽茎段30 s，然后在转移到0.1%升汞溶液（滴有2～3滴吐温）中处理3～12 min。将消毒处理后的外植体用无菌水冲洗4～5次，用灭菌滤纸滤干后放在超净工作台上备用。接种时，在超净工作台上将单芽茎段修剪成1 cm左右，插入灭菌培养基。每个处理接种20瓶，每瓶接种1个外植体，重复3次，于接种15 d后统计污染率、褐化率以及存活率，选择最佳消毒方式。污染率/%=污染的外植体个数/接种外植体总数×100；褐化率/%=未污染的褐变外植体个数/接种外植体总数×100；存活率/%=存活的外植体个数/接种外植体总数×100。
1.2.2 初代培养 初代培养使用的启动培养基为MS+0～0.5 mg/L NAA（1-naphthaleneacetic acid）+0～4 mg/L 6-BA（6-benzylaminopurine）。每个处理组合接种20瓶，每瓶接种1个外植体，3次重复，30 d后统计萌芽率。萌芽率/%=产生芽的外植体数/总的接种外植体数×100。
1.2.3 继代培养 将初代培养生长出来的腋芽接种于附加0～0.2 mg/L NAA、0～4 mg/L 6-BA的MS培养基上，每个处理接种20瓶，每瓶接种1个外植体，3次重复，20 d后统计增殖系数。增殖系数=继代增殖培养1个周期后产生的芽数/增殖培养前转接的芽数。