【摘 要】
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目的 观察在垂体腺瘤GH3细胞ghrelin/pERK1/2信号通路中发挥关键作用的蛋白激酶C(PKC)亚型,探讨该途径的详细信号转导机制.方法 4种不同PKC亚型抑制剂分别作用于GH3细胞,Western blot检测pERK1/2表达,初步判定在上述信号通路中发挥重要作用的PKC亚型;然后设计、合成、转染针对初步筛选出的PKC亚型的特异性siRNA,检测pERK1/2表达,从而明确介导该信号途
【机 构】
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430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科,武汉市中心医院神经外科,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同
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目的 观察在垂体腺瘤GH3细胞ghrelin/pERK1/2信号通路中发挥关键作用的蛋白激酶C(PKC)亚型,探讨该途径的详细信号转导机制.方法 4种不同PKC亚型抑制剂分别作用于GH3细胞,Western blot检测pERK1/2表达,初步判定在上述信号通路中发挥重要作用的PKC亚型;然后设计、合成、转染针对初步筛选出的PKC亚型的特异性siRNA,检测pERK1/2表达,从而明确介导该信号途径的关键PKC亚型.免疫共沉淀研究与该亚型可能相互作用的蛋白激酶.结果 综合分析4种抑制剂对pERK1/2表达的影响,发现nPKC在该信号通路中起关键作用.PKCδ沉默后,ghrelin诱导的pERK1/2高表达明显降低(P＜0.05),而PKCε、PKCθ沉默后对ghrelin诱导的pERK1/2高表达则无明显影响(P＞0.05).ghrelin作用后,与PKCδ结合的raf-1蛋白明显增加.结论 PKCδ为调控GH3细胞ghrelin/pERK1/2信号通路的关键信号分子,并且可能在raf-1水平与受体酪氨酸激酶/ERK1/2信号通路发生"交叉通讯"。
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