【摘 要】
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人血小板生成素(thrombopoietin,TPO)基因组包括6个外显子和5个内含子,内含子在其表达过程中可能扮演着重要作用.为了研究人TPO基因组中不同内含子对TPO表达的影响,构建可在
【机 构】
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南方医科大学生物技术学院,南方医科大学公共卫生与热带医学学院,华南理工大学生命科学院,上海医学遗传研究所
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人血小板生成素(thrombopoietin,TPO)基因组包括6个外显子和5个内含子,内含子在其表达过程中可能扮演着重要作用.为了研究人TPO基因组中不同内含子对TPO表达的影响,构建可在转基因动物乳腺中高水平表达人TPO的乳腺特异性表达质粒.本研究以65 kb的山羊β-casein启动子为调控元件,构建了包括人TPO cDNA(pTPOA)、TPO intron Ⅰ-TPO cDNA(pTPOB)、△TPO intronⅠ-TPO cDNA(pTPOC)、TPO intron Ⅴ-TPO cDNA(pTPOD)和TPO gDNA(pTPOE)等5种TPO乳腺特异性表达质粒,并在人乳腺细胞HC-11细胞上进行了瞬间表达研究.在转染48 h后,通过双抗体夹心的ELISA方法定量分析上述质粒在HC-11细胞上的表达水平.结果表明,含有内含子Ⅴ的pTPOD的表达量最高,而含有整个基因组TPO的pTPOE表达水平最低.为了进一步证实pTPOD可在乳腺细胞中高水平表达,将pTPOD经脂质体包埋后注射到泌乳期山羊的乳腺中.结果显示,在山羊乳汁中可连续14 d检测到人TPO的表达.上述实验证实,人TPO基因组中的内含子Ⅴ可显著提高TPO在HC-11细胞内的表达水平,并提示内含子Ⅴ中可能含有特殊的调控序列.
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