【摘 要】
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目的研究建立用克隆、表达和鉴定人自身抗原组氨酰转移核糖核酸合成酶(HARS,亦称Jo-1抗原)检测多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)自身免疫抗体的方法.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PC
【机 构】
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南京军区福州总医院全军医学检验中心
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目的研究建立用克隆、表达和鉴定人自身抗原组氨酰转移核糖核酸合成酶(HARS,亦称Jo-1抗原)检测多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)自身免疫抗体的方法.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从HL-60细胞株中克隆人自身抗原Jo-1全长基因,将PCR产物直接进行TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,并转入大肠杆菌BL-21;阳性克隆鉴定后在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,然后对其产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(IBT)检测.结果 PCR产物约1 500 bp,与预期1 526 bp接近,测序结果与基因库核酸完全一致.pGEX-5T- Jo-1重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和IBT结果显示,融合蛋白分子量75 000,具有天然人自身抗原Jo-1的免疫原性.结论成功克隆表达人自身抗原Jo-1,为建立PM/DM自身免疫抗体检测方法奠定了基础.
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