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摘要：目的 验证克伦特罗胶体金快检试剂法的适用性。方法 采用LC-MS方法与克伦特罗胶体金检测市售畜产品中克伦特罗残留量，对比快检方法与实验室传统仪器检测法测定的结果，分析胶体金试剂盒的适用性。结果 通过对90批次的猪牛羊肉中克伦特罗残留量的检测，胶体金快速检测法与LC-MS测定的结果进行分析比较，结果一致性达92%。结论 克伦特罗胶体金快速检测法基本可用于畜产品中克伦特罗残留量的检测。
关键词：克伦特罗；胶体金；快检；验证
民以食为天，食以安为先，食品是人类赖以生存和发展的最基本的物质条件。随着我国经济的快速发展和人民生活水平提高，食品安全问题受到广泛的关注。食品安全不仅关系到民生，还涉及到我国社会的长治久安。然而近年来，我国食品频频爆发出质量问题，一些不良企业通过各种方式和渠道，生产出问题食品流通于市面，给人们的健康带来危害。问题食品经过监管部门的抽样，到检测部门的法定方法检测，再到执法部门依据相关法规判罚，需要一定的周期时间完成，再加上传统的实验室检测方法比较繁琐，耗时，一定程度上增加了食品的检验周期，大大减弱了流程的时效性。对监督工作带来许多不便，因此催生出了快检技术。快检技术具有操作简单，快速，省时，省力。目前市场上快检试剂盒，快检仪器主要用于食品的初步的快速筛查，胶体金快检法是否能够准确的筛查出阳性样品，假阳性率多少，本实验將采用实验室规定的《GB/T22286-2008动物源性食品中-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》LC-MS法对样本进行检测，检测结果与胶体金快检法进行对比验证。
1 胶体金快检法
1.1 产品简介
本产品用于快速检测组织样本中克伦特罗残留，适用于各类企业、检测机构、监督部门的现场快速检测。
1.2 检测限（ug/㎏=ppb）
1ug/㎏
1.3 适用范围
猪、牛、羊肉（精瘦肉为宜）
1.4 样品处理
1.4.1 将去脂、绞碎的精肉组织样本4克以上，装入离心管中，拧紧管盖（勿让水进入离心管中），在90℃以上水浴锅中加热10分钟（肉熟透为准）立即取出样品渗透液。
1.4.2 样品渗出液冷却至室温（20～25℃）后，待测。
1.5 检测步骤
1.5.1 使用前将测试卡和待测样本溶液恢复至室温（20～25℃）。
1.5.2 拆开包装袋，取出检测卡，并在一小时内使用。
1.5.3 将检测卡平放，用滴管吸取待检样品溶液，垂直滴加4滴（约120ul）于加样孔中，加样后开始计时。
1.5.4 结果应在5分钟读取，其他时间判读无效。
1.6 结果判断
1.6.1 阴性（-）：T线显色比C线显色深或一样深，表示样品中待检测物质浓度低于检测限，或不含待测物质。
1.6.2 阳性（+）：T线显色比C线显色浅，或T线无显色，则表示样品中待检测物质浓度高于检测限。
1.6.3 无效：质控线C线未显色，表明操作过程不正确或检测卡已失效。
1.7 仪器判读
将待判读检测卡插入仪器，选择对应项目和批号进行检测，根据仪器显示结果进行判读。
1.8 测定结果
通过胶体金试剂检测卡对90批次样品进行快速检测，阳性样品6批次，阴性样品84批次。（其中有4批次假阳性样品，通过再次快检试验，验证为阴性）。
2 LC-MS法
2.1 样品制备
2.1.1 提取
称取2g（精确到0.01 g）经捣碎的样品与于50ML离心管中，加入8ml乙酸钠缓冲液，充分混匀，再加50ul-葡萄糖醛甙酶，混匀后，37℃水浴水解12h.添加100 ul 10ng/ml的内标工作液克伦特罗-D9于待测样品中。加盖置于水平振荡器震荡15分钟，离心10分钟，（5000r/min），取4ml上清液加入0.1mol/l高氯酸溶液5ml混合均匀，用高氯酸调节PH值在1±0.3。5000r/min离心10min后，将全部上清液转移到50 ML离心管中，用10mol/L氢氧化钠溶液调节PH值到11。加入10Mlb饱和氯化钠溶液和10mL异丙醇+乙酸乙酯（6+4）混合溶液，充分提取，在5000r/min下离心10min。转移全部有机相，在40℃水浴下用氮气将其吹干。加入5mL乙酸钠缓冲液，超声混匀，使残渣充分溶解备用
2.1.2 净化
将阳离子交换小柱连接到真空过柱装置。将上述残渣溶液上柱，依次用2ml水、2ml 2%甲酸水溶液和2ml甲醇洗涤柱子并彻底抽干，最后用2ml的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测组分。洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。准确加入200 ul 0.1%甲酸/水-甲醇溶液（95+5），超声混匀。将溶液转移到1.5ml离心管中，15000r/min离心10min。上清液供LC-MS测定。
2.2 样品检测
色谱柱：C18柱；流动相：0.1%甲酸水溶液+0.1%甲酸乙腈（梯度洗脱）；流速：0.2ml/min；柱温：30℃；离子源：ESI（+）；质谱条件优化到最优灵敏度。按照优化条件测定样品和标准工作溶液，以色谱峰面积按内标法定量。
2.3 测定结果
通过LC-MS对90批次样品进行分析检测，阳性样品5批次，阴性样品批次数85批次。
3 胶体金快检法与LC-MS法验证结果比较
通过胶体金快速检测90批次样品，结果表明该快检法适用于畜产品中克伦特罗残留量的快速检测，且与LC-MS法测定的结果基本相符，阳性重合率达到98.86%，可以初步筛查出超标样品。克伦特罗胶体金试剂盒快检法基本可用于畜产品中克伦特罗的检测。
4 讨论
在食品检验检测过程中，采用快检技术能促进食品质量的提升，保障市场中食品的质量，大大地提高了监管部门执法的时效性。胶体金快检法采用竞争抑制免疫层析技术的原理，实验过程中样品提取时间，反应温度，提取液的量受环境等不确定因素的影响，会使实验结果失真，出现假阳性，因此，为更好的发挥快速检测作用，把控食品中非法添加物的残留，有必要进一步提高和改进实验条件和试验人员的技能，对快件技术能够熟练的运用，使其能够成为打击假劣产品的重要武器，为人民的饮食安康保驾复航。
参考文献：
[1]桑圆圆，柴丽娜，等。酶抑制法检测4种辛辣蔬菜农药残留量假阳性消除的研究〔J〕.中国农学通报，2009，25（11）；60-64
[2]克伦特罗胶体金快速检测使用说明书。
[3]《GB/T 22286-2008 动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法》
关键词：克伦特罗；胶体金；快检；验证
民以食为天，食以安为先，食品是人类赖以生存和发展的最基本的物质条件。随着我国经济的快速发展和人民生活水平提高，食品安全问题受到广泛的关注。食品安全不仅关系到民生，还涉及到我国社会的长治久安。然而近年来，我国食品频频爆发出质量问题，一些不良企业通过各种方式和渠道，生产出问题食品流通于市面，给人们的健康带来危害。问题食品经过监管部门的抽样，到检测部门的法定方法检测，再到执法部门依据相关法规判罚，需要一定的周期时间完成，再加上传统的实验室检测方法比较繁琐，耗时，一定程度上增加了食品的检验周期，大大减弱了流程的时效性。对监督工作带来许多不便，因此催生出了快检技术。快检技术具有操作简单，快速，省时，省力。目前市场上快检试剂盒，快检仪器主要用于食品的初步的快速筛查，胶体金快检法是否能够准确的筛查出阳性样品，假阳性率多少，本实验將采用实验室规定的《GB/T22286-2008动物源性食品中-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》LC-MS法对样本进行检测，检测结果与胶体金快检法进行对比验证。
1 胶体金快检法
1.1 产品简介
本产品用于快速检测组织样本中克伦特罗残留，适用于各类企业、检测机构、监督部门的现场快速检测。
1.2 检测限（ug/㎏=ppb）
1ug/㎏
1.3 适用范围
猪、牛、羊肉（精瘦肉为宜）
1.4 样品处理
1.4.1 将去脂、绞碎的精肉组织样本4克以上，装入离心管中，拧紧管盖（勿让水进入离心管中），在90℃以上水浴锅中加热10分钟（肉熟透为准）立即取出样品渗透液。
1.4.2 样品渗出液冷却至室温（20～25℃）后，待测。
1.5 检测步骤
1.5.1 使用前将测试卡和待测样本溶液恢复至室温（20～25℃）。
1.5.2 拆开包装袋，取出检测卡，并在一小时内使用。
1.5.3 将检测卡平放，用滴管吸取待检样品溶液，垂直滴加4滴（约120ul）于加样孔中，加样后开始计时。
1.5.4 结果应在5分钟读取，其他时间判读无效。
1.6 结果判断
1.6.1 阴性（-）：T线显色比C线显色深或一样深，表示样品中待检测物质浓度低于检测限，或不含待测物质。
1.6.2 阳性（+）：T线显色比C线显色浅，或T线无显色，则表示样品中待检测物质浓度高于检测限。
1.6.3 无效：质控线C线未显色，表明操作过程不正确或检测卡已失效。
1.7 仪器判读
将待判读检测卡插入仪器，选择对应项目和批号进行检测，根据仪器显示结果进行判读。
1.8 测定结果
通过胶体金试剂检测卡对90批次样品进行快速检测，阳性样品6批次，阴性样品84批次。（其中有4批次假阳性样品，通过再次快检试验，验证为阴性）。
2 LC-MS法
2.1 样品制备
2.1.1 提取
称取2g（精确到0.01 g）经捣碎的样品与于50ML离心管中，加入8ml乙酸钠缓冲液，充分混匀，再加50ul-葡萄糖醛甙酶，混匀后，37℃水浴水解12h.添加100 ul 10ng/ml的内标工作液克伦特罗-D9于待测样品中。加盖置于水平振荡器震荡15分钟，离心10分钟，（5000r/min），取4ml上清液加入0.1mol/l高氯酸溶液5ml混合均匀，用高氯酸调节PH值在1±0.3。5000r/min离心10min后，将全部上清液转移到50 ML离心管中，用10mol/L氢氧化钠溶液调节PH值到11。加入10Mlb饱和氯化钠溶液和10mL异丙醇+乙酸乙酯（6+4）混合溶液，充分提取，在5000r/min下离心10min。转移全部有机相，在40℃水浴下用氮气将其吹干。加入5mL乙酸钠缓冲液，超声混匀，使残渣充分溶解备用
2.1.2 净化
将阳离子交换小柱连接到真空过柱装置。将上述残渣溶液上柱，依次用2ml水、2ml 2%甲酸水溶液和2ml甲醇洗涤柱子并彻底抽干，最后用2ml的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测组分。洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。准确加入200 ul 0.1%甲酸/水-甲醇溶液（95+5），超声混匀。将溶液转移到1.5ml离心管中，15000r/min离心10min。上清液供LC-MS测定。
2.2 样品检测
色谱柱：C18柱；流动相：0.1%甲酸水溶液+0.1%甲酸乙腈（梯度洗脱）；流速：0.2ml/min；柱温：30℃；离子源：ESI（+）；质谱条件优化到最优灵敏度。按照优化条件测定样品和标准工作溶液，以色谱峰面积按内标法定量。
2.3 测定结果
通过LC-MS对90批次样品进行分析检测，阳性样品5批次，阴性样品批次数85批次。
3 胶体金快检法与LC-MS法验证结果比较
通过胶体金快速检测90批次样品，结果表明该快检法适用于畜产品中克伦特罗残留量的快速检测，且与LC-MS法测定的结果基本相符，阳性重合率达到98.86%，可以初步筛查出超标样品。克伦特罗胶体金试剂盒快检法基本可用于畜产品中克伦特罗的检测。
4 讨论
在食品检验检测过程中，采用快检技术能促进食品质量的提升，保障市场中食品的质量，大大地提高了监管部门执法的时效性。胶体金快检法采用竞争抑制免疫层析技术的原理，实验过程中样品提取时间，反应温度，提取液的量受环境等不确定因素的影响，会使实验结果失真，出现假阳性，因此，为更好的发挥快速检测作用，把控食品中非法添加物的残留，有必要进一步提高和改进实验条件和试验人员的技能，对快件技术能够熟练的运用，使其能够成为打击假劣产品的重要武器，为人民的饮食安康保驾复航。
参考文献：
[1]桑圆圆，柴丽娜，等。酶抑制法检测4种辛辣蔬菜农药残留量假阳性消除的研究〔J〕.中国农学通报，2009，25（11）；60-64
[2]克伦特罗胶体金快速检测使用说明书。
[3]《GB/T 22286-2008 动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法》