观察上调微小RNA-148a(miR-148a)表达对胰腺癌AsPC-1细胞抑癌基因前脑啡肽原(ppENK)、p16和Ras相关区域家族1A基因(RASSF1A)甲基化、蛋白表达及细胞增殖的影响。
方法利用Lipofectamine™2000转染miR-148a模拟物(miR-148a mimics)至胰腺癌AsPC-1细胞。实验细胞分为3组：空白对照组(转染脂质体)、阴性对照组(转染阴性对照序列)、实验组(转染miR-148a mimics)。转染后72 h，采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞中miR-148a表达水平；甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测ppENK、p16和RASSF1A基因启动子甲基化；Western blot法检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)及ppENK、p16和RASSF1A蛋白表达水平；噻唑蓝(MTT)法检测细胞体外增殖活力。
结果实验组miR-148a的表达量显著高于空白对照组及阴性对照组(4.63±1.32比1.00±0.30比0.93±0.37，P＝0.002)，而DNMT1蛋白表达量则显著降低(1.00±0.00比1.04±0.19比0.27±0.15，P＝0.001)。空白对照组和阴性对照组ppENK、p16和RASSF1A基因甲基化阳性，而实验组ppENK和p16基因甲基化阴性，RASSF1A基因部分甲基化。实验组ppENK、p16和RASSF1A蛋白表达量均显著高于两个对照组(ppENK：2.06±0.32比1.00±0.00比1.01±0.21，P＝0.002；p16：2.02±0.12比1.00±0.00比0.96±0.12，P＝0.000；RASSF1A：1.95±0.37比1.00±0.00比1.09±0.12，P＝0.002)。实验组细胞体外增殖活力显著减慢(P＝0.026)。
结论上调胰腺癌AsPC-1细胞miR-148a的表达后，抑癌基因ppENK、p16和RASSF1A发生去甲基化，蛋白质重新表达，并抑制癌细胞增殖，其作用机制与miR-148a靶向抑制DNMT1表达有关。