【摘 要】
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目的探讨宫颈癌细胞株HeLa细胞稳定转染表达短发夹状RNA(shRNA)的质粒后,HeLa细胞中人乳头状瘤病毒18型E6基因(HPV18E6)表达的变化.方法实验组将本实验室前期构建的可遗传性
【机 构】
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长沙,湖南省计划生育研究所,湖南师范大学生命科学院
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目的探讨宫颈癌细胞株HeLa细胞稳定转染表达短发夹状RNA(shRNA)的质粒后,HeLa细胞中人乳头状瘤病毒18型E6基因(HPV18E6)表达的变化.方法实验组将本实验室前期构建的可遗传性表达HPV18E6 shRNA的pE6-1shRNA质粒和含E6基因突变点的pE6-2shRNA质粒分别转染HeLa细胞,对照组以空质粒pSUPER和不加质粒的脂质体分别转染HeLa细胞.稳定转染后,氨基糖苷抗生素(G418)筛选阳性细胞克隆,RT-PCR技术和免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法分别检测HeLa细胞中HPV18E6 mRNA和蛋白表达的变化.结果稳定转染后,G418筛选,实验组HeLa细胞有新的阳性细胞克隆形成,而对照组HeLa细胞最终全部死亡.实验组转染pE6-1shRNA质粒的HeLa细胞中HPV18E6 mRNA表达水平为0.76±0.28,明显低于对照组转染脂质体者(1.14±0.45)和转染pSUPER质粒者(1.12±0.23,P0.05).结论稳定转染表达HPV18E6 shRNA的质粒后,宫颈癌细胞中HPV18E6 mRNA和蛋白表达明显受到抑制.
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