目的建立高效液相色谱（HPLC）法测定家兔血浆中士的宁的浓度。方法通过考察碱液种类及浓度、萃取次数、萃取剂种类及加入量、加萃取剂后的涡旋时间和破膜剂种类等对士的宁绝对回收率的影响,确定血浆样品处理方法。检测方法为HPLC法,采用Agilent 5 TC-C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5μm）和Agilent TC-C₁₈预柱（12.5 mm×4.6 mm,5μm）;流动相:甲醇-0.01 mol/L庚烷磺酸钠与0.02 mol/L磷酸二氢钾等量混合（用10%磷酸调p H至3.0）-乙腈（0.5∶79.5∶20.0）;检测波长:254 nm;流速:1.0 m L/min;柱温:25℃。结果采用该方法处理血浆后,血浆内源性物质对样品测定无干扰。士的宁在2.99¹99.02 ng/mL线性关系良好（r=0.9985）;血浆中士的宁的绝对回收率为76.21%⁸4.90%,方法回收率为85.53%¹10.67%,日内、日间精密度均符合要求。样品室温放置24 h和冻融循环3次稳定性良好,-20℃储存10 d内稳定性良好,样品处理后室温放置24 h内稳定性良好。结论该法操作简便,灵敏、准确,可用于家兔灌胃含马钱子的中成药后血浆中士的宁的浓度检测。