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摘要：目的：建立反相高效液相色谱测定不同产地鬼针草中芦丁和金丝桃苷含量的方法。方法：Diamonsil C18色谱柱（5μm，250×4.6mm）；流动相：乙腈-0.2%冰醋酸梯度洗脱；流速：1mL/min；检测波长：360nm。结果：芦丁在5.12-128.0μg/ml（r=0.9998）、金丝桃苷在4.96-124.0μg/ml（r=0.9997）范围内线性良好，芦丁平均回收率为99.16%，RSD%=1.44%；金丝桃苷回收率为99.35%，RSD%=1.02%。结论：不同产地鬼针草中芦丁和金丝桃苷的含量变化较大，通过测定两种成分的含量可有效控制鬼针草药材的质量。
关键词：鬼针草；芦丁；金丝桃苷；RP-HPLC；含量测定
小花鬼针草Bidens parviflora willd.隶属于菊科鬼针草，产于中国东北、华北、西南及山东、河南、陕西、甘肃等地。全草入药，有清热解毒、活血散瘀之效，主治感冒发热、咽喉肿痛、肠炎、阑尾炎、痔疮、跌打损伤、冻疮、毒蛇咬伤[1]。药理和临床研究表明小花鬼针草中黄酮类成分具有降压作用[2，3]。为进一步开发该药用资源，为其质量控制和临床用药提供参考，本文采用HPLC法测定了不同产地小花鬼针草中芦丁和金丝桃苷的含量。
1、仪器与试药
Agilient1100 高效液相色谱仪（美国）；AUY220电子分析天平（日本）；鬼针草药材2015年采集于不同产地，经本校生药系李峰教授鉴定为小花鬼针草Bidens parviflora willd.。芦丁（批号100080-200707）、金丝桃苷（批号111521-201004）对照品购于中国药品生物制品检定所，液相色谱实验用试剂为色谱纯，其他试剂均为国产分析纯。
2、方法与结果
2.1色谱条件[4]：Diamonsil C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；乙腈-0.2%冰醋酸梯度洗脱，洗脱程序为0～5min，5%乙腈；5～15min，5%→20%乙腈；15～25min，20%→25%乙腈；25～35min，25%→30%乙腈；35～45min，30%→60%乙腈；45～60min，60%→5%乙腈；流速：1mL/min；柱温：30℃；检测波长：360nm；进样量10ul。
2.2对照品溶液的制备
分别精密称定芦丁和金丝桃苷对照品适量，用甲醇溶解稀释定容至100ml，摇匀，稀释成含芦丁25.6ug/mL、金丝桃苷24.8ug/mL的对照品液。
2.3供试品溶液的制备
取本品粉末（过三号筛）约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（250W，50kHz）30分钟，放冷，称重，70%甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45um微孔滤膜过滤，即得。
2.4线性关系考察
精密吸取0ml，0.2ml，0.5ml，1.0 ml，2.0 ml，5.0ml系列对照品溶液于10ml量瓶中，用70%甲醇稀释定容，按色谱条件测定，以峰面积A对标准品质量浓度作图，得芦丁回归方程：Y=1207.5X+498.46（r=0.9998），金丝桃苷回归方程：Y=979.88X-178.32（r=0.9997）。芦丁在5.12～128.0μg/ml、金丝桃苷在4.96～124.0μg/ml范围内呈良好线性关系。
2.5精密度试验
精密量取芦丁和金丝桃苷对照品溶液10uL，重复进样5次，测定峰面积，计算，结果表明芦丁的RSD为2.08%，金丝桃苷的RSD为1.76%，表明精密度良好。
2.6稳定性试验
取芦丁和金丝桃苷对照品溶液，分别于0、1、2、4、8、12h分别进样测定，考察其稳定性。结果表明：芦丁和金丝桃苷的RSD分别为2.15%和1.82%，表明在12h内基本稳定。
2.7重复性试验
取同一批号的鬼针草样品5份，分别按样品含量测定法测定，芦丁和金丝桃苷RSD分别1.26%和1.98%。
2.8回收率试验
取已知含量的鬼針草样品，精密称定0.5g，共取5份，精密加入芦丁对照品适量，按含量测定法测定得峰面积，并计算含量，平均回收率为99.16%，RSD为1.44%。同样方法测定金丝桃苷平均回收率为99.35%，RSD为1.02%。
2.9样品测定
按上述方法，取不同产地的鬼针草进行含量测定。结果显示：芦丁含量范围在1.35～1.64mg之间。金丝桃苷含量范围在0.88～0.96mg之间。结果见表1
3 讨论
3.1鬼针草含黄酮、挥发油等多种成分。黄酮类化合物是其发挥活血化瘀、通脉降压作用的主要成分，对于心血管疾病有预防和治疗作用，对芦丁、金丝桃苷成分进行含量测定，可为该药的开发利用提供科学依据。由于鬼针草来源复杂，黄酮类成分的含量存在较大差别。
3.2 采用HPLC法测定鬼针草中芦丁及金丝桃苷含量，该方法能将色谱峰有效分离，方法精密度、重复性及线性关系好，回收率满意，故本法可以作为鬼针草质量控制方法。
参考文献：
[1]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海科学出版社，2005.
[2]徐俊，潘开瑞，刘方洲.鬼针草总黄酮药效学研究进展. 中医学报，2017，32（227）：610-612
[3]沈艺玮，林丽清，林新华，等.鬼针草的化学成分及药理活性研究进展.福建医科大学学报，2015，49（1）：58-61
[4]刘红燕.HPLC法同时测定小花鬼针草中3 种黄酮类成分含量.山东科学，2014，27（2）：44-46
作者简介：
孙萌（1996-），女，本科生，研究方向为中药有效成分与质量控制。
通讯作者：
周洪雷（1967-），男，教授，从事中药及天然药物有效成分及质量控制研究，
关键词：鬼针草；芦丁；金丝桃苷；RP-HPLC；含量测定
小花鬼针草Bidens parviflora willd.隶属于菊科鬼针草，产于中国东北、华北、西南及山东、河南、陕西、甘肃等地。全草入药，有清热解毒、活血散瘀之效，主治感冒发热、咽喉肿痛、肠炎、阑尾炎、痔疮、跌打损伤、冻疮、毒蛇咬伤[1]。药理和临床研究表明小花鬼针草中黄酮类成分具有降压作用[2，3]。为进一步开发该药用资源，为其质量控制和临床用药提供参考，本文采用HPLC法测定了不同产地小花鬼针草中芦丁和金丝桃苷的含量。
1、仪器与试药
Agilient1100 高效液相色谱仪（美国）；AUY220电子分析天平（日本）；鬼针草药材2015年采集于不同产地，经本校生药系李峰教授鉴定为小花鬼针草Bidens parviflora willd.。芦丁（批号100080-200707）、金丝桃苷（批号111521-201004）对照品购于中国药品生物制品检定所，液相色谱实验用试剂为色谱纯，其他试剂均为国产分析纯。
2、方法与结果
2.1色谱条件[4]：Diamonsil C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；乙腈-0.2%冰醋酸梯度洗脱，洗脱程序为0～5min，5%乙腈；5～15min，5%→20%乙腈；15～25min，20%→25%乙腈；25～35min，25%→30%乙腈；35～45min，30%→60%乙腈；45～60min，60%→5%乙腈；流速：1mL/min；柱温：30℃；检测波长：360nm；进样量10ul。
2.2对照品溶液的制备
分别精密称定芦丁和金丝桃苷对照品适量，用甲醇溶解稀释定容至100ml，摇匀，稀释成含芦丁25.6ug/mL、金丝桃苷24.8ug/mL的对照品液。
2.3供试品溶液的制备
取本品粉末（过三号筛）约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（250W，50kHz）30分钟，放冷，称重，70%甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45um微孔滤膜过滤，即得。
2.4线性关系考察
精密吸取0ml，0.2ml，0.5ml，1.0 ml，2.0 ml，5.0ml系列对照品溶液于10ml量瓶中，用70%甲醇稀释定容，按色谱条件测定，以峰面积A对标准品质量浓度作图，得芦丁回归方程：Y=1207.5X+498.46（r=0.9998），金丝桃苷回归方程：Y=979.88X-178.32（r=0.9997）。芦丁在5.12～128.0μg/ml、金丝桃苷在4.96～124.0μg/ml范围内呈良好线性关系。
2.5精密度试验
精密量取芦丁和金丝桃苷对照品溶液10uL，重复进样5次，测定峰面积，计算，结果表明芦丁的RSD为2.08%，金丝桃苷的RSD为1.76%，表明精密度良好。
2.6稳定性试验
取芦丁和金丝桃苷对照品溶液，分别于0、1、2、4、8、12h分别进样测定，考察其稳定性。结果表明：芦丁和金丝桃苷的RSD分别为2.15%和1.82%，表明在12h内基本稳定。
2.7重复性试验
取同一批号的鬼针草样品5份，分别按样品含量测定法测定，芦丁和金丝桃苷RSD分别1.26%和1.98%。
2.8回收率试验
取已知含量的鬼針草样品，精密称定0.5g，共取5份，精密加入芦丁对照品适量，按含量测定法测定得峰面积，并计算含量，平均回收率为99.16%，RSD为1.44%。同样方法测定金丝桃苷平均回收率为99.35%，RSD为1.02%。
2.9样品测定
按上述方法，取不同产地的鬼针草进行含量测定。结果显示：芦丁含量范围在1.35～1.64mg之间。金丝桃苷含量范围在0.88～0.96mg之间。结果见表1
3 讨论
3.1鬼针草含黄酮、挥发油等多种成分。黄酮类化合物是其发挥活血化瘀、通脉降压作用的主要成分，对于心血管疾病有预防和治疗作用，对芦丁、金丝桃苷成分进行含量测定，可为该药的开发利用提供科学依据。由于鬼针草来源复杂，黄酮类成分的含量存在较大差别。
3.2 采用HPLC法测定鬼针草中芦丁及金丝桃苷含量，该方法能将色谱峰有效分离，方法精密度、重复性及线性关系好，回收率满意，故本法可以作为鬼针草质量控制方法。
参考文献：
[1]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海科学出版社，2005.
[2]徐俊，潘开瑞，刘方洲.鬼针草总黄酮药效学研究进展. 中医学报，2017，32（227）：610-612
[3]沈艺玮，林丽清，林新华，等.鬼针草的化学成分及药理活性研究进展.福建医科大学学报，2015，49（1）：58-61
[4]刘红燕.HPLC法同时测定小花鬼针草中3 种黄酮类成分含量.山东科学，2014，27（2）：44-46
作者简介：
孙萌（1996-），女，本科生，研究方向为中药有效成分与质量控制。
通讯作者：
周洪雷（1967-），男，教授，从事中药及天然药物有效成分及质量控制研究，