【摘 要】
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目的 分析入骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)与其来源的汗腺样细胞微小RNAs(miRNAs)差异表达谱.方法 采用成骨、成脂细胞诱导分化液诱导hBM-MSCs分化,油红O和茜素红染色分别进行
【机 构】
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300070,天津医科大学研究生院解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室;
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目的 分析入骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)与其来源的汗腺样细胞微小RNAs(miRNAs)差异表达谱.方法 采用成骨、成脂细胞诱导分化液诱导hBM-MSCs分化,油红O和茜素红染色分别进行鉴定.当原代汗腺细胞密度达到70％～ 80％时进行热休克处理,然后将其与hBM-MSCs通过Transwell进行共培养诱导;10 d后分别提取hBM-MSCs和其诱导分化的汗腺样细胞的总RNA,纯化标记后,进行miRNAs杂交和数据分析以及靶基因预测.进一步采用实时荧光定量PCR验证芯片结果的可靠性.结果 差异表达水平绝对值＞2倍的miRNAs有68个,其中上调的19个,下调的49个;其中13个表达水平发生显著变化,差异表达水平＞5倍(miRNA-132-3p、-4467、-4484、-146a-5p、-6126等5个上调;miRNA-708-5p、-138-5p、-6812-5p、-138-1-3p、-1281、-3157-3p、-4298、-4459等8个下调).靶向汗腺发育相关通路核因子κB、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶、Wnt/β-连环蛋白和外胚叶发育不全基因/外胚叶发育不全基因受体的miRNAs有18个.其中上调的miRNA-146a-5p和下调的miRNA-6812-5p验证结果与芯片结果具有一致性.结论 hBM-MSCs与其来源的汗腺样细胞之间有明显的miRNAs差异性表达,其中13个差异表达＞5倍的miRNAs和18个与汗腺发育通路有关的miRNAs可能在hBM-MSCs向汗腺样细胞分化过程中有重要的调控作用.
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